1、本文針對(duì)柑橘潰瘍病對(duì)我國(guó)柑橘產(chǎn)業(yè)的嚴(yán)重危害,從植物源殺菌劑和化學(xué)殺菌藥劑兩個(gè)方面對(duì)柑橘潰瘍病菌的防治藥劑進(jìn)行了室內(nèi)研究。在抗菌植物活性篩選中,以采自廣西北部及桂東南地區(qū)的90個(gè)科共193種植物為篩選對(duì)象,植物材料經(jīng)甲醇冷浸提取后,測(cè)定了193種植物提取物對(duì)柑橘潰瘍病菌的抗菌活性。在抗菌活性篩選的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)抑制活性較高的2種中藥植物廣東蛇葡萄Ampelopsis cantoniensis(Hook. et Arn.) Planch.

2、和猴耳環(huán)Pithecellobium clypearia(Jack) Benth.進(jìn)行抗菌活性成分分離,并鑒定出活性成分的結(jié)構(gòu),初步研究了兩種中藥植物對(duì)柑橘潰瘍病菌的抗菌作用機(jī)制。對(duì)目前生產(chǎn)上常用的14種殺菌藥劑進(jìn)行了抑菌活性篩選,并將植物提取物與殺菌藥劑進(jìn)行二元復(fù)配,初步研究了混配劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的抑制活性。采用帶藥平板涂布法測(cè)定了193種植物提取物的抑菌活性。結(jié)果表明:在10mg/mL的質(zhì)量濃度下,有15種植物提取物的抑菌活性好,7

3、2h能完全抑制柑橘潰瘍病菌的生長(zhǎng),它們分別是廣東蛇葡萄、猴耳環(huán)、楓楊、鉤吻、黔桂千金藤、廣西地不容、杠板歸、扁擔(dān)藤、桉、番石榴、細(xì)葉桉、厚皮香、老虎刺、大青和欖李;有金毛狗和山莓2種植物提取物48h完全抑制柑橘潰瘍病菌的生長(zhǎng);而24h完全抑制柑橘潰瘍病菌生長(zhǎng)的植物提取物共計(jì)23種,分別為買麻藤、馬甲子、虎杖、水石榕、黃金鳳、中華獼猴桃、金線吊烏龜、木防己、野漆、鹽膚木、朝天罐、金錢柳、野鴨椿、四川大頭茶、細(xì)齒葉柃、木荷、長(zhǎng)毛柃、油茶、嶺

4、南山竹子、紅背山麻桿、葉下珠、海漆和石菖蒲。在室內(nèi)進(jìn)一步測(cè)定了這15種植物提取物對(duì)柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度(MIC)。發(fā)現(xiàn)廣東蛇葡萄和猴耳環(huán)提取物對(duì)柑橘潰瘍病菌的抑制活性最高,MIC均為2mg/mL;其次是楓楊、鉤吻、黔桂千金藤和廣西地不容提取物,MIC分別為6mg/mL、6mg/mL、8mg/mL和8mg/mL;其余9種植物提取物的MIC均為10mg/mL。分別測(cè)定了廣東蛇葡萄枝和葉提取物以及猴耳環(huán)枝、葉和花提取物的抑菌活性,發(fā)現(xiàn)兩

5、種植物的活性成分在枝和葉中均有分布,且主要存在于葉中。其中,廣東蛇葡萄枝和葉提取物對(duì)柑橘潰瘍病菌的MIC分別為4mg/mL和2mg/mL;猴耳環(huán)枝、葉和花的MIC分別為4mg/mL、2mg/mL和4mg/mL。采用有機(jī)溶劑液-液萃取法將廣東蛇葡萄枝和葉提取物初步分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物4個(gè)部分,經(jīng)活性測(cè)定,表明枝和葉抗菌活性成分均主要存在于乙酸乙酯萃取物中。廣東蛇葡萄乙酸乙酯萃取物經(jīng)4次硅膠柱層析后獲得活

6、性流分2-11。同法對(duì)猴耳環(huán)枝和葉提物物進(jìn)行了初步分離,將提取物初步分為石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物4個(gè)部分,經(jīng)活性測(cè)定,發(fā)現(xiàn)猴耳環(huán)枝和葉抗菌活性成分均主要存在于乙酸乙酯萃取物中。通過反復(fù)硅膠柱層析和薄層層析,結(jié)合活性跟蹤,從猴耳環(huán)乙酸乙酯萃取物中分離獲得1個(gè)活性化合物,經(jīng)核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)解析,鑒定為沒食子酸甲酯。沒食子酸甲酯對(duì)柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度為1mg/mL。對(duì)目前生產(chǎn)上常用的14種殺菌

7、藥劑進(jìn)行室內(nèi)抑菌活性篩選,采用帶藥平板涂布法測(cè)定了14種殺菌藥劑對(duì)柑橘潰瘍病菌的最低抑菌濃度(MIC)。在14種供試藥劑中,其中10種殺菌藥劑60％甲硫·異菌脲WP、80%代森錳鋅WP、72%農(nóng)用鏈霉素SP、2%加收米SL、硫酸銅晶體、53.8%可殺得WDG、25%甲霜靈WP、64%殺毒礬WP、20%葉枯唑WP和58%甲霜·錳鋅WP對(duì)柑橘潰瘍病菌的MIC分別為10mg/mL、10mg/mL、2.5mg/mL、2.5mg/mL、0.625

8、mg/mL、0.3125mg/mL、0.3125mg/mL、0.1563mg/mL、0.1563mg/mL和0.0391mg/mL,抑制活性由高到低的順序依次為58%甲霜·錳鋅WP＞20%葉枯唑WP和64%殺毒礬WP＞25%甲霜靈WP和53.8%可殺得WDG＞硫酸銅晶體＞2%加收米SL和72%農(nóng)用鏈霉素SP＞80%代森錳鋅WP和60%甲硫·異菌脲WP。另外4種藥劑50%敵克松WP、20%噻唑鋅SC、15%三唑酮WP和3%中生菌素WP對(duì)柑

9、橘潰瘍病菌的MIC均大于最大處理濃度10mg/mL(50倍液)、10mg/mL(20倍液)、2.5mg/mL(60倍液)和0.3125mg/mL(96倍液)。室內(nèi)藥劑篩選表明,14種藥劑中,58%甲霜·錳鋅WP對(duì)柑橘潰瘍病菌的抑制活性最高,20%葉枯唑WP、64%殺毒礬WP、25%甲霜靈WP和53.8%可殺得WDG也具有很好的抑菌效果。在殺菌藥劑活性篩選基礎(chǔ)上,將2種抗菌活性植物提取物與4種抑制活性高的殺菌藥劑53.8%可殺得WDG、6

10、4%殺毒礬WP、20%葉枯唑WP和58%甲霜·錳鋅WP配制成一定質(zhì)量比和系列濃度的混配劑,并對(duì)柑橘潰瘍病菌進(jìn)行抑制活性測(cè)定。其中,抑菌活性較高的有4種混配劑,即廣東蛇葡萄:53.8%可殺得WDG(1:1)、廣東蛇葡萄:64%殺毒礬WP(1:1)、猴耳環(huán):53.8%可殺得WDG(1:1)和猴耳環(huán):64%殺毒礬WP(1:1)混配劑。采用活菌平板計(jì)數(shù)法和干重法分別測(cè)定了廣東蛇葡萄提取物、猴耳環(huán)提取物以及沒食子酸甲酯對(duì)柑橘潰瘍病病菌菌落生長(zhǎng)和生