1、目的：
　　 以豁眼鵝為試驗材料，構建豁眼鵝細菌人工染色體文庫，并對文庫進行質(zhì)量鑒定，為永久保存和利用其遺傳資源、開展與其重要經(jīng)濟性狀相關的功能基因篩選研究提供試驗材料和技術保證。
　　 方法：
　　 采集豁眼鵝翅靜脈血，利用瓊脂糖包埋法獲得高分子質(zhì)量（HMW）DNA；通過Hind Ⅲ、EcoRI和BamH I 3 種限制性內(nèi)切酶酶切濃度梯度預實驗，得到最佳酶切反應條件，并進行二次脈沖電泳分離并回收100 kb～

2、500 kb的DNA 片段；利用電洗脫方法將DNA 片段從瓊脂糖凝膠塊上洗脫下來，并使用PEG8000 對其進行濃縮和純化處理；以pBeloBAC11 為載體，進行連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B感受態(tài)細胞；利用藍白斑篩選挑取和保存陽性單克??；對保存的文庫進行插入片段大小、克隆穩(wěn)定性和基因組覆蓋率等方面的質(zhì)量鑒定。
　　 結果：
　　 酶切濃度梯度試驗表明，Hind Ⅲ為最佳限制性內(nèi)切酶，且最佳酶用量為40 U/μL Hin

3、d Ⅲ。
　　 本研究共挑取了115，200個克隆，隨機挑選了100個BAC 克隆，對其外源插入片段大小的分析表明，外源插入片段在40 kb～200 kb之間，平均大小為102 kb，空克隆的比例為0.6％，基因組覆蓋率為11.4 倍。將BAC 克隆保存于300 塊384 孔板中。挑選5個較大片段的BAC 克隆，連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)5天，每天代表20 代，分別提取第一天和第五天的質(zhì)粒DNA，進行Hind Ⅲ酶切及瓊脂糖凝膠電泳分析以確定

4、文庫的穩(wěn)定性，結果表明帶型無明顯差異，說明BAC 克隆在連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)過程中十分穩(wěn)定。
　　 結論：
　　 本研究成功構建了含115，200個克隆的豁眼鵝細菌人工染色體文庫。該文庫具有外源插入片段大、基因組覆蓋率高、空載率低等特點。
　　 對文庫的質(zhì)量檢測證實所構建的文庫可滿足相關試驗的需要；BAC 克隆經(jīng)繼代培養(yǎng)說明所得到的豁眼鵝BAC系統(tǒng)十分穩(wěn)定。本研究構建的豁眼鵝細菌人工染色體文庫適用于功能基因克隆和物理圖譜