1、萬(wàn)壽菊(Tagetes erectaL．)是菊科萬(wàn)壽菊屬一年生植物。其花色鮮艷，開(kāi)花繁多，具有較高的觀賞價(jià)值，在城市綠化中被廣泛應(yīng)用。同時(shí)萬(wàn)壽菊的花和葉能鎮(zhèn)靜、降壓、擴(kuò)張支氣管，其揮發(fā)油具有抗菌、抑菌、抗憂郁及殺蟲(chóng)等多種作用。近年來(lái)，從萬(wàn)壽菊中提取出來(lái)的葉黃素是食品、化妝品、煙草、醫(yī)藥及禽類飼料的重要原料，素有“軟黃金”的美譽(yù)，發(fā)展前景十分廣闊。國(guó)內(nèi)外對(duì)其需求量較大，但是由于受自然條件等的限制，通過(guò)播種和扦插不能滿足市場(chǎng)需要。因此，通過(guò)

2、組織培養(yǎng)進(jìn)行快速繁殖勢(shì)在必行。同時(shí)，隨著人們生活水平的提高，對(duì)花卉的要求越來(lái)越多，試管花卉以其新穎、微小、便于攜帶等特點(diǎn)被人們普遍接受，但其種類較少，不能滿足市場(chǎng)需要，進(jìn)行萬(wàn)壽菊試管開(kāi)花研究具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。 本試驗(yàn)通過(guò)組織培養(yǎng)，研究萬(wàn)壽菊的快速繁殖、試管開(kāi)花以及花芽誘導(dǎo)過(guò)程中其內(nèi)部生理生化變化，建立萬(wàn)壽菊的離體快繁體系和試管開(kāi)花體系，縮短組培苗由營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變時(shí)間，同時(shí)探討萬(wàn)壽菊的花芽分化規(guī)律。 在萬(wàn)壽

3、菊快速繁殖研究中，探討了不同外植體、培養(yǎng)基、滅菌方式、封口材料、pH值以及不同濃度的6—BA、NAA、瓊脂對(duì)萬(wàn)壽菊不同外植體誘導(dǎo)不定芽的影響。結(jié)果表明： (1)對(duì)于帶腋芽的莖段、頂芽、葉片和花蕾這些外植體來(lái)說(shuō)，帶腋芽的莖段和頂芽極易誘導(dǎo)產(chǎn)生大量的叢生芽，是萬(wàn)壽菊誘導(dǎo)不定芽產(chǎn)生的首選外植體； (2)帶腋芽的莖段在B5和White培養(yǎng)基中發(fā)芽率較低，在MS中發(fā)芽率最高，芽長(zhǎng)得比較健壯，并且形成側(cè)枝，是最利于萬(wàn)壽菊快速繁殖的培

4、養(yǎng)基； (3)0.1％(W/V)ngCl2處理萬(wàn)壽菊莖段9min是最佳的滅菌方式； (4)不同濃度的6—BA、NAA對(duì)萬(wàn)壽菊葉片和帶腋芽莖段的不定芽誘導(dǎo)具有顯著差異。6—BA分別和不同濃度的NAA、IAA、2,4-d)組合對(duì)其不定芽誘導(dǎo)也存在差異。以帶腋芽的莖段為外植體，適宜其快繁的培養(yǎng)基為MS+6—BA0.2mg.L-1+NAA0.15mg.L-1；對(duì)于葉片來(lái)說(shuō)，最佳的快繁培養(yǎng)基是MS+6—BA0.2mg.L-1+IA

5、A0.05mg.L-1； (5)培養(yǎng)基中不同的瓊脂濃度對(duì)不定芽的誘導(dǎo)具有顯著影響，當(dāng)瓊脂濃度為7g.L-1時(shí)，芽的長(zhǎng)勢(shì)最好，帶腋芽莖段其不定芽的誘導(dǎo)率明顯比葉片的高8.2％； (6)不同的封口材料對(duì)萬(wàn)壽菊葉片和帶腋芽莖段誘導(dǎo)效果有顯著差異。使用透氣封口膜，其不定芽生長(zhǎng)速度快，植株生長(zhǎng)旺盛； (7)無(wú)論是帶腋芽莖段還是葉片，pH為5.8時(shí)，不定芽的誘導(dǎo)率均達(dá)到最高，芽的長(zhǎng)勢(shì)也較好。 在萬(wàn)壽菊試管開(kāi)花研究中，

6、重點(diǎn)研究了不同濃度的6—BA、NAA、蔗糖、多效唑、矮壯素、活性炭以及不同轉(zhuǎn)接時(shí)間對(duì)萬(wàn)壽菊組培苗花芽誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明： (1)不同濃度的6—BA和NAA在一定配比下，對(duì)萬(wàn)壽菊試管苗誘導(dǎo)花芽形成具有明顯的促進(jìn)作用。6—BA為0.5mg.L-1，NAA為0.1mg.L-1時(shí)最利于花芽分化。單獨(dú)添加6—BA對(duì)試管苗的花芽誘導(dǎo)起抑制作用，濃度越高抑制作用越強(qiáng)，甚至還影響花的顏色。 (2)當(dāng)活性炭濃度為0.3mg.L-1時(shí)，植

7、株不生根，長(zhǎng)愈傷組織，花芽能正常開(kāi)放。但當(dāng)濃度增加到0.5mg.L-1時(shí)，植株生根，花芽不能正常開(kāi)放。 (3)當(dāng)蔗糖濃度為40g.L-1時(shí)，花芽誘導(dǎo)率最高。隨著蔗糖濃度升高，花芽誘導(dǎo)率也隨之升高，但是達(dá)到50g.L-1時(shí)會(huì)輕微玻璃化。 (4)當(dāng)萬(wàn)壽菊組培苗培養(yǎng)15d轉(zhuǎn)接時(shí)，花芽誘導(dǎo)率最高，30d統(tǒng)計(jì)花芽誘導(dǎo)率達(dá)到324％，60d時(shí)達(dá)到58.6％。 (5)多效唑能抑制萬(wàn)壽菊幼苗的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，從而促進(jìn)生殖生長(zhǎng)，提高花芽

8、誘導(dǎo)率。當(dāng)多效唑濃度為0.4mg.L-1時(shí)，花芽誘導(dǎo)率最高，60d時(shí)達(dá)到30.9％；(6)矮壯素的使用濃度為0.5mg.L-1時(shí)較宜誘導(dǎo)花芽分化，其誘導(dǎo)效果沒(méi)有多效唑的明顯，60dt寸花芽誘導(dǎo)率僅19.7％。 在萬(wàn)壽菊花芽誘導(dǎo)過(guò)程中，組培苗內(nèi)部發(fā)生了相應(yīng)的生理生化變化。結(jié)果表明： (1)可溶性蛋白含量在處理初期(0～20d)，由3.390mg.g-1．FW上升到5.718mg.g-1．FW，達(dá)到最高值，比對(duì)照組的(4.4

9、10mg.g-1．FW)高出1.308mg.g-1．FW。 (2)可溶性糖含量明顯高于可溶性蛋白質(zhì)含量，在30d時(shí)達(dá)到最高值15.252mg.g-1．FW，是花芽誘導(dǎo)最主要的物質(zhì)基礎(chǔ)。 (3)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，無(wú)論是處理組還是對(duì)照組，葉黃素含量都隨之增加，到30d呈現(xiàn)最高。 (4)處理組中內(nèi)源IAA含量明顯高于對(duì)照組的，21d時(shí)，處理組的內(nèi)源IAA含量達(dá)到17.556nmol．g-1．FW，比對(duì)照組的高出7.5