1、本文對斑點(diǎn)叉尾鮰皰疹病毒核酸探針檢測方法進(jìn)行了研究。采用PCR方法制備地高辛標(biāo)記DNA探針，分別建立了CCV PCR-ELISA檢測方法和斑點(diǎn)雜交檢測方法，主要結(jié)果如下：
　　 1．根據(jù)CCV的ORF6基因設(shè)計(jì)引物和捕獲探針，其中捕獲探針的5’端標(biāo)記生物素，PCR產(chǎn)物在擴(kuò)增過程中標(biāo)記地高辛，利用經(jīng)鏈親和素包被的聚苯乙烯96孔酶標(biāo)板固相雜交檢測PCR產(chǎn)物，建立了CCV的PCR-ELISA檢測方法。
　　 2．進(jìn)行PCR反應(yīng)

2、條件的優(yōu)化，結(jié)果表明：優(yōu)化的PCR反應(yīng)條件為25μL反應(yīng)體系：1×PCR緩沖液、0.4 mmol/L dNTP、4 mmol/L Mg2+、上下游引物各0.4 mmol/L、Tag DNA聚合酶1.0 U、模板1μL、用滅菌去離子水補(bǔ)足體積25μL。PCR擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性5 min、94℃30 s、58℃45 s、72℃30 s、35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min，4℃保溫。在最優(yōu)的PCR反應(yīng)條件下，將dNTP替換為DIG-dN

3、TP，進(jìn)行PCR產(chǎn)物標(biāo)記反應(yīng)，電泳結(jié)果表明成功將PCR產(chǎn)物標(biāo)記上地高辛。
　　 3．建立PCR產(chǎn)物的固相雜交檢測程序，并進(jìn)行雜交條件的優(yōu)化，結(jié)果表明最優(yōu)的固相雜交檢測參數(shù)為：最優(yōu)探針包被濃度為50 pmol/mL；最優(yōu)的雜交溫度為42℃；最優(yōu)的雜交時(shí)間為90 min。
　　 4．方法的特異性和敏感度檢測實(shí)驗(yàn)表明：反應(yīng)特異性強(qiáng)，與各對照均無交叉反應(yīng)；反應(yīng)敏感度為5fg CCV DNA。
　　 5．利用所建立的檢測方