1、本論文通過(guò)4個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行游離棉酚對(duì)小白鼠泌尿系統(tǒng)的影響研究。 試驗(yàn)一: 不同濃度梯度游離棉酚對(duì)小白鼠體重和泌尿系統(tǒng)的影響研究。隨機(jī)選取90只24.69±1.01g雄性昆明小白鼠，隨機(jī)分為5組，0 mg/kgBW*d，40 mg/kgBW*d，80 mg/kgBW*d，120 mg/kgBW*d，160 mg/kgBW*d。預(yù)試期7d，正試期6周。觀察試驗(yàn)過(guò)程中小鼠體質(zhì)狀況，稱重，分別在第2周和第6周，采集各組小鼠腎臟進(jìn)行HE染色切

2、片鏡檢。結(jié)果表明：飼喂棉酚3周內(nèi)對(duì)小鼠體重增長(zhǎng)的影響較小，后期對(duì)小鼠生長(zhǎng)具有抑制作用；飼喂棉酚會(huì)引起小鼠腎臟出現(xiàn)腎間質(zhì)出血、腎梗死、腎顆粒變性壞死、腎小球毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血，出血等組織損傷。 試驗(yàn)二: 棉酚對(duì)小白鼠血清中鉀鎂鈣磷的影響研究。在試驗(yàn)第2周和第6周，采集各組小鼠血液，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中鉀、鎂、鈣、磷的含量。結(jié)果顯示，40-120mg/kgBW*d的棉酚濃度飼喂雄性昆明小白鼠，會(huì)引起小白鼠低血鉀，在該棉酚濃度

3、范圍內(nèi)，對(duì)各組小鼠血清中鈣、鎂、磷的含量影響差異不顯著。 試驗(yàn)三: 小白鼠腎小管上皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法的建立。用膠原酶Ⅳ和胰蛋白酶消化法，從幼鼠和成年鼠分離培養(yǎng)昆明小白鼠原代腎小管上皮細(xì)胞，用一抗為1：400Cytoteratin 18，二抗為1：100的山羊抗小鼠的抗體對(duì)其進(jìn)行特異性鑒定，結(jié)果表明：成年鼠腎臟分離效果比幼鼠好；消化10min得到的細(xì)胞產(chǎn)量較多；膠原酶Ⅳ消化效果較好，比胰蛋白酶消化法分離的細(xì)胞貼壁早，且貼壁數(shù)量

4、多；腎小管上皮細(xì)胞鑒定結(jié)果為陽(yáng)性。 試驗(yàn)四: 棉酚對(duì)小白鼠腎小管上皮細(xì)胞的影響研究。對(duì)腎小管上皮細(xì)胞按照添加棉酚濃度分成14個(gè)組，分別添加0μ/ml、1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml、125μg/ml、62.5μg/ml、31.3μg/ml、1000μg/ml的左旋棉酚和消旋棉酚。分別在棉酚接觸細(xì)胞24h，48h，72h和96h時(shí)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，用試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)液中HDL酶活力，用超微量ATP酶

5、試劑盒測(cè)細(xì)胞內(nèi)CMA酶和NKA活力。結(jié)果表明：細(xì)胞凋亡率與消旋棉酚濃度和作用時(shí)間具有明顯依從性，即細(xì)胞凋亡率隨消旋棉酚濃度的升高而增大，隨棉酚作用時(shí)間延長(zhǎng)而增大；左旋棉酚只有在作用48h時(shí)，細(xì)胞凋亡率與棉酚濃度和作用時(shí)間具有明顯依從性。LDH泄漏量與棉酚接觸腎小管上皮細(xì)胞的時(shí)間具有依從性，與棉酚濃度沒有依從關(guān)系，但各濃度棉酚都會(huì)造成不同程度的細(xì)胞損傷。細(xì)胞內(nèi)NKA活性與棉酚濃度和作用時(shí)間具有相關(guān)性，細(xì)胞酶NKA活力隨棉酚作用時(shí)間的延長(zhǎng)而