1、我國(guó)近幾年由于種植業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整和畜牧業(yè)的迅猛發(fā)展，苜蓿的種植面積急劇擴(kuò)大，解決生產(chǎn)上迫在眉睫的品種秋眠性選擇以及探討國(guó)際上秋眠機(jī)理不清所帶來(lái)的困擾，急需我國(guó)在秋眠性研究上有所突破。目前對(duì)苜蓿秋眠性機(jī)理研究很比較少，僅從一些形態(tài)學(xué)變化和生理生化指標(biāo)水平上的差別等來(lái)研究苜蓿的秋眠性，但這并非是調(diào)控苜蓿秋眠的根本原因，因此迫切需要一種更先進(jìn)的方法對(duì)苜蓿秋眠性的機(jī)理及其調(diào)控進(jìn)行研究。有研究表明，光敏色素與苜蓿的秋眠性相關(guān)，而光敏色素家族至少包含

2、有兩種光敏色素基因A和B，且這些光敏色素之間都相互聯(lián)系、相互制約。低溫和短日照是引起苜蓿秋眠性的主要環(huán)境因子，phyA、phyB作為主要的光受體調(diào)節(jié)苜蓿的秋眠，為探討phyA、phyB在苜蓿秋眠中的調(diào)控機(jī)理，本試驗(yàn)分為兩個(gè)部分，溫度試驗(yàn)：試驗(yàn)在短日照（8h）的情況下，研究不同溫度5℃、15℃、25℃、35℃對(duì)秋眠型苜蓿（Vernal）phyA、phyBmRNA相對(duì)含量的影響；光周期試驗(yàn)：采用SYERGreen熒光染料法來(lái)測(cè)定不同光周期（

3、8h、12h、16h）和（6h、12h、18h）對(duì)三種秋眠型苜蓿phyA、phyBmRNA相對(duì)含量，首先，選取紫花苜蓿葉片為材料，利用蒺藜狀苜蓿的肌動(dòng)蛋白基因設(shè)計(jì)特異性引物，擴(kuò)增出目的基因的cDNA進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在NCBI基因庫(kù)中利用Blast與其他高等植物肌動(dòng)蛋白基因序列進(jìn)行了比對(duì)、分析，結(jié)果證明所提取的基因?yàn)樽匣ㄜ俎＜?dòng)蛋白基因的片段，因此，可以進(jìn)行下一步mRNA的相對(duì)定量。 溫度試驗(yàn)采用半定量RT-PCR方法（灰度分析

4、），來(lái)測(cè)定在8h（短日照）條件下，不同溫度處理對(duì)秋眠型苜蓿（二級(jí)品種——佛拿爾）phyA、phyBmRNA相對(duì)含量的影響，試驗(yàn)證明phyA在較低溫度情況下合成量較低，溫度較高時(shí)合成量較高，而phyB在較低溫度的條件下合成量顯著高于在較高溫度條件下合成量，這說(shuō)明phyA、phyB確實(shí)存在在互作效應(yīng)，或者也可能是與其他光敏色素家族成員產(chǎn)生互作，在低溫短日照條件下phyB合成量高，這說(shuō)明phyB在調(diào)控秋眠中發(fā)揮了更重要的作用。 光周期

5、試驗(yàn)采用FQ-PCRSYBR-Green方法測(cè)定不同光周期條件下不同秋眠型苜蓿phyA、phyBmRNA的表達(dá)，試驗(yàn)證明，在短、中日照情況下，phyA、phyBmRNA含量較高，長(zhǎng)日照情況下phyA、phyBmRNA合成量較小，其中phyB合成量規(guī)律與其在蛋白水平的表達(dá)基本一致，試驗(yàn)也再次驗(yàn)證了秋眠型苜蓿的phyBmRNA的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于半秋眠型、非秋眠型苜蓿，秋眠二級(jí)phyBmRNA的表達(dá)在不同光照時(shí)間條件下，差異極顯著，在短、中日照情