鴨病毒性肝炎卵黃抗體檢測方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鴨病毒性肝炎是危害我國養(yǎng)鴨業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一,該病主要感染1月齡以下的雛鴨。預(yù)防和控制該病的主要手段是進(jìn)行免疫接種。為了更方便快速地檢測種鴨的免疫水平,本研究建立了檢測Ⅰ型鴨病毒性肝炎卵黃抗體的乳膠凝集試驗(yàn)方法和間接ELISA方法。主要完成了以下研究工作:
   第一,采用本實(shí)驗(yàn)室提純DHV-Ⅰ的方法--差速超高速離心法,得到了試驗(yàn)所用的抗原,病毒蛋白含量為8122μg/mL。
   第二,用本實(shí)驗(yàn)室已克隆表達(dá)的DHV-

2、Ⅰ VP1重組蛋白作為抗原致敏聚苯乙烯乳膠,建立了檢測DHV-Ⅰ抗體的乳膠凝集試驗(yàn)方法,確定VP1蛋白的最佳致敏量為200μg/mL,致敏溫度37℃,致敏時(shí)間2.5h。研究結(jié)果表明,致敏乳膠無自凝性,靈敏度達(dá)到74.3%,與鴨瘟、鴨疫里氏桿菌、鴨鏈球菌等無交叉反應(yīng)。
   第三,通過試驗(yàn),確定了可快速簡便提取卵黃抗體的條件,即將卵黃做1:8-1:10倍稀釋,充分?jǐn)嚢韬?℃8000 r/min離心60 min即可用致敏乳膠來檢測。

3、該條件簡便易行,可在設(shè)備簡陋的基層應(yīng)用。
   第四,用提純的DHV-Ⅰ作為包被抗原,建立了檢測DHV-Ⅰ卵黃抗體的間接ELISA方法。本方法最佳工作條件為:抗原包被濃度為1:400(5.38μg/mL),樣品稀釋濃度為1:256(9.68μg/mL),酶標(biāo)二抗稀釋濃度為1:3200,陰陽性臨界OD值為0.203。
   第五,應(yīng)用乳膠凝集試驗(yàn)方法和間接ELISA方法,對(duì)850份血清和630份卵黃樣本進(jìn)行檢測,結(jié)果表明:

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