豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及全基因組的測序與分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以妊娠母豬嚴重繁殖障礙以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為特征的傳染病。PRRS自1987年首次報道發(fā)現(xiàn)于美國以來,現(xiàn)已遍及世界各主要養(yǎng)豬國家與地區(qū),并已成為危害養(yǎng)豬業(yè)最嚴重的傳染病之一。豬繁殖與呼吸綜合征病毒是有囊膜的單股正鏈RNA病毒,依據基因序列分析,可以將PRRSV劃分為兩種基因型,即以VR2332株為代表的北美洲型和以LV株為代表的歐洲型。同其它有囊膜

2、的RNA病毒一樣,PRRSV具有高度的變異性,其毒株之間基因序列存在不同程度差異,而歐美洲型毒株之間差異更大。對近年來分離的PRRSV的序列和抗原分析發(fā)現(xiàn),不同分離株間在毒力、基因序列和抗原性方面都存在著較大的變化。
   本實驗從北京和廣東兩地發(fā)生“豬高熱病”的豬場采集病豬的血清和肺臟組織經處理后接種MARC-145細胞,結果血清接種細胞沒有出現(xiàn)病變,而肺臟組織接種的細胞在盲傳第二代就出現(xiàn)PRRSV所致的特征性病變。用同樣的血

3、清和病料接種的PK-15、BHK-21和MDCK細胞盲傳3代后均沒有出現(xiàn)病變。將分離的病毒經MARC-145細胞傳代擴大培養(yǎng)后測定的TCID50分別為10-5.48/0.1mL,10-5.71/0.1mL。用本研究室制備的PRRSV、PRV、HCV、PPV和CSFV陽性血清對分離毒株進行中和試驗,結果所分離的病毒只能被美洲型PRRSV陽性血清所中和。將病死豬的肺組織和細胞分離的病毒用透視電鏡進行觀察,結果發(fā)現(xiàn)了3種不同直徑的病毒粒子,其

4、中占主導的一種是直徑60nm左右與PRRSV大小接近的病毒粒子,此外還有120nm左右和30nm左右的兩種病毒粒子。然而在細胞分離的病毒液樣品中,我們只發(fā)現(xiàn)了60nm左右的一種病毒粒子。以上鑒定證實了所分離的病毒為豬繁殖與呼吸綜合征病毒,將其命名為PRRSV BJ株和GD株。
   利用RT-PCR方法分別擴增出PRRSV BJ株、GD株各9條基因片段,并將9個片段分別克隆于PGEM-T-easy質粒載體上進行測序,按順序將這些

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