1、對采自福建、浙江等省19個地方的95份木霉污染的食用菌菌筒和子實體樣品進(jìn)行分離，獲得了49株木霉菌株，并對這49株木霉菌株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、ITS/5.8S、RAPD鑒定分析以及生物學(xué)特性測定，調(diào)查了不同木霉侵染食用菌的能力以及食用菌菌株對木霉的抵抗力，探討了枯草芽孢桿菌BS-2對木霉的抑制作用并對枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的可用于防治食用真菌病害的活性物質(zhì)進(jìn)行了分析，同時了解了其活性物質(zhì)的成分。具體結(jié)果如下： 形態(tài)學(xué)方法以及ITS/5.8S

2、測序結(jié)果表明，49株木霉菌株分別是哈茨木霉Trichoderma harzianum Rifai，長枝木霉T. longibrachiatum Rifail，深綠木霉T.atroviride Karsten和棘孢木霉T.asperellum Samuels 4種木霉菌。形態(tài)學(xué)與ITS鑒定結(jié)果一致；棘孢木霉首次在食用菌中發(fā)現(xiàn)，深綠木霉分離到少量菌株，哈茨木霉和長枝木霉出現(xiàn)頻率最高，分別為59％和31％，似乎是食用菌栽培中優(yōu)勢污染種群；同時

3、發(fā)現(xiàn)木霉病原菌的種類與采集地點、食用菌的種類有一定相關(guān)，如在浙江慶元香菇Lentinus edodes (Berk.)sing菌筒中分離的木霉主要是哈茨木霉，在廣州刺芹側(cè)耳(杏鮑菇)Pleurotus enyngii菌筒中分離的木霉主要是棘孢木霉，而從福建浦城香菇污染袋中分離的木霉主要是深綠木霉。哈茨木霉、長枝木霉、深綠木霉和棘孢木霉的ITS總長分別為：575 bp-578 bp、579 bp-583 bp、565 bp-567bp、和

4、560 bp-561 bp，GC含量分別為：55.6％-56.7％、57.2％-58.0％、55.6％-56.1％和55.8％-55.9％；所有木霉5.8S序列完全相同，總長為159 bp，GC含量為46.5％。 不同地理來源的49株木霉用5個RAPD引物擴(kuò)增后分析結(jié)果表明，種間和種內(nèi)具豐富的遺傳多樣性，菌株間差異與地理來源和寄主有一定相關(guān)。系統(tǒng)發(fā)育樹反映的種間關(guān)系與形態(tài)分類結(jié)果基本一致，不同地理來源的相同種可以通過RAPD分析

5、區(qū)分開來。 木霉的生物學(xué)特性研究結(jié)果表明，木霉的最適溫度、最適含水量和最適生長pH分別28℃、70％和5.7。木霉對35℃以上高溫的適應(yīng)性差異較大，木霉在高溫干燥環(huán)境易產(chǎn)孢子，在潮濕環(huán)境孢子最易萌發(fā)，菌絲生長旺盛。在pH為11的培養(yǎng)基中不能生長。 對不同木霉侵染食用菌的能力進(jìn)行了研究，結(jié)果表明不同木霉對食用菌的侵染能力存在差異，侵染食用菌能力強(qiáng)的木霉對植物病原真菌的侵染能力并不一定強(qiáng)，這表現(xiàn)出木霉對真菌侵染的特異性。探討

6、了木霉侵染食用菌的機(jī)理，發(fā)現(xiàn)木霉可通過溶壁、纏繞等方式作用于食用菌菌絲細(xì)胞壁，也可通過產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)、非揮發(fā)性物質(zhì)抑制菌絲生長，但木霉產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的能力以及木霉的生長速度與木霉的侵染能力沒有直接相關(guān)。木霉經(jīng)過食用菌菌絲誘導(dǎo)后，其發(fā)酵液對食用菌菌絲的抑制作用增強(qiáng)。通過PDA平板拮抗實驗，評價了食用菌菌株的抗木霉能力，從408株不同的食用菌菌株中篩選到34株對木霉(63)有一定抵抗力的菌株，但經(jīng)過菌袋復(fù)篩，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過初篩篩選出來的菌株對侵染力強(qiáng)

7、的木霉(52)沒有抵抗力。PDA平板篩選時還發(fā)現(xiàn)，檢測的所有香菇Lentinus edodes、高溫平菇Pleurotus　cystidiosus、灰樹花Grifola frondosa和杏鮑菇Pleurotus eryngi的菌株對木霉都沒有抗性。 通過對峙培養(yǎng)、發(fā)酵液的抑菌實驗，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌BS-2對脈孢菌Neurospora、木霉、疣孢霉Mycogone都有較強(qiáng)的抑制作用，而且BS-2還會產(chǎn)生揮發(fā)性物質(zhì)抑制木霉孢子的萌

8、發(fā)。通過對BS-2進(jìn)行紫外線誘變，得到了一株對脈孢菌的抑菌活性增加215％的菌株(BS-2-E)?？莶菅挎邨U菌是食用菌栽培中的污染菌，但可以利用枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的活性物質(zhì)來防治食用菌真菌病害。 枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的脂肽類抗生素有表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)和芬枯草菌素(fengycin)，枯草芽孢桿菌BS-2以及BS-2的突變株BS-2-N和BS-2-E發(fā)酵液粗提樣的LC-MS檢測及比較分析，初步認(rèn)