1、生產(chǎn)上傳統(tǒng)的雜交育種困難，并且雜交育種周期長。通過核桃的有性繁殖與生物技術(shù)相結(jié)合的方法，將雜交后的種胚直接進行組織培養(yǎng)，當年獲得雜種苗，在兩年的時間里可獲得具有變異性狀的新的單株，既可克服生產(chǎn)上雜交育種的困難，又可縮短核桃的育種年限。核桃胚培養(yǎng)存在外植體污染率高、接種后褐變嚴重以及成活率不高等問題。本文針對這些問題，分別于2007年、2008年進行了早實核桃生殖特性、無菌繁殖體系的建立、防止核桃胚培養(yǎng)褐化技術(shù)、核桃胚培養(yǎng)條件及其快速成苗

2、途徑的研究。
　　 1.對‘綠嶺'等5個早實核桃品種的開花結(jié)果物候期、無融合生殖能力、花粉形狀與大小等生殖特性的研究結(jié)果表明：從雌花芽膨大到開放所需積溫：‘綠早'（130℃左右），‘綠嶺'、‘香玲'、‘遼1'、‘遼3'（360～410℃），‘綠早'較‘綠嶺'、‘香玲'、‘遼1'、‘遼3'品種在較低的溫度下雌花就能開放，對溫度的要求條件較低。雄先型品種‘綠嶺'、‘香玲'、‘遼3'、‘遼1'雄花花期（自雄花散粉初期至散粉末期）分別為

3、13d、17d、18d、13d，一般為13～18d，雌花花期（雌花開放初期至末花期）分別為9d、9d、9d、8d；一般為8～11d；雌雄花期分別相差15d、16d、19d、15d。雌先型品種‘綠早'核桃的混合花芽于3月20日開始膨大，從膨大到開花約需11d，花期（指開花初期至末花期）約為11d；雄花芽于3月18日開始膨大，雄花在4月9日開放，花期（自散粉初期至末期）為15d；雌雄花期相差8d，分別于花后15d、30d進入坐果期、生理落果

4、期。雌先型和雄先型核桃品種均具有無融合生殖能力，雌先型品種的無融合生殖能力低于雄先型。不同早實核桃品種間無融合生殖率有明顯差異；‘綠嶺'核桃無融合生殖率最高，為42.10％，‘香玲'、‘遼1'次之，‘綠早'無融合生殖率最低，為11.64％。在所測定的早實核桃品種中，‘綠早'、‘遼3'的花粉生活力均在93％以上，‘香玲'核桃花粉的生活力極顯著低于其它品種，僅為62.72％；‘綠早'柱頭向兩側(cè)張開呈倒‘八'字形時，柱頭接受花粉能力最強，為授

5、粉的最佳時期，之后柱頭逐漸開始枯萎，失去授粉能力?！G早'核桃的有效授粉期為開花后1～6d，最佳授粉期為開花后2～5d。
　　 2.‘香玲'自然雜種核桃經(jīng)儲藏后進行胚培養(yǎng)，接種1周后，帶子葉種胚用0.1％的HgCl2消毒5min的污染率最低，為7％，不消毒的污染率最高，達87％；采集果實后立即進行胚培養(yǎng)，對帶子葉種胚用25％、15％NaClO和75％酒精消毒，接種后均未發(fā)生污染。試驗選用的4種培養(yǎng)基中，核桃雜交胚培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基

6、為MS+3％蔗糖+0.6％～0.8％瓊脂，pH值6.0～7.0，在此培養(yǎng)基上雜交胚的萌發(fā)率最高，為90.2％，生根率達89.6％；最適培養(yǎng)環(huán)境為：光照強度4000LX、溫度25～30℃；組培苗后期最佳壯苗培養(yǎng)基為DKW+2mg·L-16-BA+1.0mg·L-1IAA；在蛭石、沙子和普通壤土3種移栽基質(zhì)處理中，以將核桃生根苗移栽到沙子基質(zhì)中成活率最高，達83.3％；普通壤土基質(zhì)次之，為80％；蛭石基質(zhì)最低，僅為40％。硬核期核桃雜交胚培

7、養(yǎng)萌發(fā)率可達到86.6％，與成熟期核桃胚培養(yǎng)相比可提前40d成苗。青皮果經(jīng)4℃低溫儲藏1周、2周均可促進組培雜交胚胚根的伸長，但對后期的莖葉生長沒有影響。
　　 3.不同種胚接種方式中，以帶子葉接種種胚褐化最嚴重，接種當天便有褐化發(fā)生，接種1d后全部褐化，培養(yǎng)基褐化面積大；其次是帶1/2子葉種胚褐化較重，接種1d后全部褐化，培養(yǎng)基褐化面積小；而不帶子葉的種胚接種后不產(chǎn)生褐化；培養(yǎng)基中添加300～500mg·L-1的PVP和5.0