1、本文采用純培養(yǎng)方法，結合樣品所在地環(huán)境生態(tài)特征，設計不同分離培養(yǎng)基，建立適合河南云臺山、云南騰沖和越南下龍灣地區(qū)三個地區(qū)原核微生物純培養(yǎng)分離技術，并對這三個地區(qū)的原核微生物的群落多樣性進行了研究。本研究設計了10種分離培養(yǎng)基，從上述三個地區(qū)土壤中分離到了大量細菌和放線菌，并將之分離、純化與保藏。將分離純化的細菌和放線菌進行16S rRNA基因擴增并測序，通過序列比對、系統(tǒng)發(fā)育分析等手段對分離到的原核微生物進行多樣性分析，探討三個地區(qū)微生

2、物多樣性分布特點，確定候選新屬與新種，并比較分析三個地區(qū)原核微生物群落組成特點及物種相似性。
　　從云臺山地區(qū)土壤樣品中共分離和保存了258株純培養(yǎng)物，其中84株已經測序，通過序列比對顯示這些菌株分布于6個目，12個科，17個屬中，并分離到1個潛在新種。此次共分離到芽孢桿菌34株，與芽孢菌屬(Bacillus)的9個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的41.46％;其次是節(jié)桿菌，共17株，與節(jié)桿菌屬(Arthrobacte

3、r)的8個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的20.73％。此地區(qū)原核微生物多樣性指數分別為:Shannon-Wienner多樣性指數H'=4.664;Simpson指數D=0.914;Margalef物種豐富度指數dMa=9.705;Shannon物種均勻度指數E=1.232。
　　騰沖地區(qū)分離的280株純培養(yǎng)物中已測序151株，序列比對顯示這些菌株分布于8個目，21個科，32個屬中，并且有2個候選新屬和4個候選新種。此

4、次共分離到鏈霉菌31株，與鏈霉菌屬的12個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的20.53％;其次是芽孢桿菌，共分離到22株，與芽孢桿菌屬的5個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的14.57％。此地區(qū)原核微生物多樣性指數分別為:Shannon-Wienner多樣性指數H'=5.678;Simpson指數D=0.971;Margalef物種豐富度指數dMa=14.55;Shannon物種均勻度指數E=1.320。
　　

5、在下龍灣地區(qū)共分離和保存499株菌株，其中的266株已經測序，序列比對顯示這些菌株分布于12個目，29個科，54個屬，并分離到5個候選新種，1個候選新屬。此次共分離到芽孢桿菌25株，與芽孢菌屬(Bacillus)的14個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的9.4％;其次是鏈霉菌，共19株，與鏈霉菌屬（Streptomyces）的13個種有最近的系統(tǒng)發(fā)育關系，占該地區(qū)已測序菌株的7.14％。此地區(qū)原核微生物多樣性指數分別為:Sha

6、nnon-Wienner多樣性指數H'=6.970;Simpson指數D=0.987;Margalef物種豐富度指數dMa=27.40;Shannon物種均勻度指數E=1.384。
　　以上結果表明，在下龍灣地區(qū)存在著豐富多樣的原核微生物，而云臺山地區(qū)原核微生物的物種較為單一。通過計算這三個地區(qū)兩兩之間的Jaccard相似性指數可以看出，云臺山地區(qū)和下龍灣地區(qū)之間原核微生物物種相似性為3.12％，云臺山地區(qū)和騰沖地區(qū)之間為4.42