產幾丁質酶卵寄生真菌存厚垣普奇尼亞菌(Pochonia chlamydosporia)對根結線蟲生防潛力的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、根結線蟲(Meloidogynespp.)是世界性分布的威脅農業(yè)生產的主要病原物之一。該病害嚴重威脅我國保護地蔬菜和果樹的生產?;瘜W殺線劑給環(huán)境乖農產品帶來安全隱患,而利用天敵真菌防治植物線蟲病害的生防措施成為替代措施之一。
   本研究對從7株不同來源的根結線蟲卵寄生真菌—厚垣普奇尼亞菌進行了生物學和生化特性及其對南方根結線蟲的生防潛力的研究。
   1采用玻片和平板菌落培養(yǎng)的方法,對7株不同來源的卵寄生真菌—厚垣普奇

2、尼亞菌進行了形態(tài)學觀察和比較。結果表明,不同菌株在形態(tài)和培養(yǎng)性狀上存在明顯差異。各菌株在CMA培養(yǎng)基上的生長速率不同,CFCC80919生長最快,氣生菌絲發(fā)達;CFCC80919和CFCC84964菌落背面乳白色;QNAV97-5分生孢子梗細長。7個菌株均能夠產生菌絲膨大和厚垣孢子,其中QNAV97-6和CFCC84963厚垣孢子著生方式除間生外還有側生,NRRL13094厚垣孢子大量間生成串,CFCC84964和CFCC84963厚垣

3、孢子稀少。QNAV97-2、QNAV97-5、CFCC84963、NRRL13094和CFCC80919能產生晶體。
   2厚垣普奇尼亞菌各菌株在玉米粉液體培養(yǎng)基內產生厚垣孢子的能力不同,菌株CFCC84964產厚垣孢子能力最強,菌株CFCC84963產厚垣孢子能力最弱。在第2d,7個菌株都沒有產生厚垣孢子;第4d厚垣孢子的產生出現(xiàn)差異,菌株QNAV97-2、QNAV97-6、CFCC84964和CFCC80919開始有厚垣孢

4、子產生;第20d,菌株CFCC84964厚垣孢子可達到106.65×104個/mL,菌株CFCC84963厚垣孢子僅有29.12×104個/mL。
   37株厚垣普奇尼亞菌在含有0.2%膠體幾丁質(colloidalchitin)為主要C源和N源的半液體培養(yǎng)基內,他們的培養(yǎng)濾液存在明顯差異。其中QNAV97-5、QNAV97-6和CFCC84963培養(yǎng)濾液未測定出幾丁質降解酶活性。具有幾丁質降解酶系的4個菌株從第2d開始測定出

5、活性,CFCC80919酶活性上升迅速,第12d就達到酶活性高峰值10.99μmol/hmL,隨后緩慢下降;而QNAV97-2和CFCC84964第24d達到酶活性高峰,分別為21.39μmol/hmL和17.30μmol/hmL,至32d仍保持高峰活性水平;NRRL13094第28d達到酶活性高峰值15.79μmol/hmL,隨后略有下降。
   47株厚垣普奇尼亞菌從第2d開始均能產生幾丁質外切酶(N-acetyl-β-D-

6、glucosaminidase)。其中CFCC80919、CFCC84964培養(yǎng)濾液第6d達到酶活性高峰,至32d一直保持高水平活性,穩(wěn)定在0.21-0.23μmol/hmL之間;而QNAV97-2培養(yǎng)濾液酶活性第4d快速上升至0.13μmol/hmL,隨后下降,20d后又明顯上升,第28d達到高峰值0.20μmol/hmL;NRRL13094培養(yǎng)濾液酶活性第14d達到高峰值0.09μmol/hmL,隨后下降。在未測定出幾丁質降解酶系的

7、3株厚垣普奇尼亞菌中,QNAV97-6和CFCC84963培養(yǎng)濾液幾丁質外切酶活性較高,第6d達高峰值,分別為0.21μmol/hmL和0.17μmol/hmL;QNAV97-5酶活性緩慢上升,至30d達高峰值0.13μmol/hmL。
   5應用含0.01%糖基化幾丁質的改良SDS-PAGE電泳檢測厚垣普奇尼亞菌具幾丁質酶活性的蛋白譜帶,并估算他們產生的幾丁質酶的分子量。CFCC84964有4條幾丁質酶活性譜帶,分子量分別為

8、17kDa、19.1kDa、22.9kDa和26.3kDa;CFCC80919有2條幾丁質酶活性譜帶,分子量分別為27.5kDa和38.9kDa;QNAV97-2有2條幾丁質酶活性譜帶,分子量分別為39.8kDa和50.1kDa;NRRL13094有2條幾丁質酶活性譜帶,分子量分別為81.3kDa和97.7kDa。厚垣普奇尼亞菌具有較高產生幾丁質酶的活性,其產生的幾丁質酶可以引起根結線蟲卵殼的裂解,抑制根結線蟲卵的孵化。
  

9、6厚垣普奇尼亞菌7個菌株的幾丁質酶培養(yǎng)濾液對根結線蟲卵孵化具有不同程度的抑制作用。28℃下培養(yǎng),7個菌株的培養(yǎng)濾液在濃度遞增的情況下,對根結線蟲的卵孵化抑制率隨時間的增加而遞增。其中培養(yǎng)7d,25%濃度的培養(yǎng)濾液對根結線蟲的卵孵化抑制率最大。比較25%濃度下各菌株對根結線蟲卵孵化的抑制率可知,菌株QNAV97-2對根結線蟲卵孵化的抑制率最高,7d可達到55.15%;菌株CFCC84963對根結線蟲卵孵化的抑制率最低,7d達到12.14%

10、。
   7對測定出幾丁質降解酶活性的4個厚垣普奇尼亞菌培養(yǎng)2周后,在2%水瓊脂培養(yǎng)基上直接測定菌絲對根結線蟲卵和雌蟲的寄生情況。QNAV97-2、NRRL13094、CFCC84964和CFCC80919都可以寄生根結線蟲的卵和雌蟲,卵寄生率分別為55.62%、57.13%、47.87%和52.75%;雌蟲寄生率分別為85%、90%、80%和95%。菌絲對卵和雌蟲的寄生程度有差異。
   綜上所述,厚垣普奇尼亞菌QNA

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