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![雙價復等位抗性基因?qū)肱嘤龔V譜抗病水稻品系的研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/ac9901a8-f5a7-4b16-b6a6-7475e78768d8/ac9901a8-f5a7-4b16-b6a6-7475e78768d81.gif)
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文檔簡介
1、水稻是中國乃至世界上最重要的糧食作物之一,稻瘟病是世界范圍內(nèi)影響水稻生產(chǎn)最嚴重的真菌性病害。長期的實踐表明,利用水稻自身的抗病免疫系統(tǒng),培育抗病水稻品種是防治稻瘟病最經(jīng)濟有效的方法。研究抗病基因的功能機制,以及不同抗病基因間的互補效應,對培育廣譜抗病品種有重要意義。本研究通過體外遺傳重組,在3個前人克隆的復等位抗病基因Pi9、Pi2和Piz-t的3’端分別融合了蛋白標簽cMyc、AcV5以及HA序列,并通過農(nóng)桿菌介導法分別轉(zhuǎn)化并培育了攜
2、帶Pi9、Pi2-AcV5和Piz-t-CHA基因的水稻植株。進一步對轉(zhuǎn)基因植株進行分析,主要結(jié)果如下:
1、分別構(gòu)建了載體pC1301-NBS2-Pi9-cMyc,pC1305-NBS4-Pi2-AcV5和pC2300-NBS2-Pi9-cMyc;分別得到56個,54個和70個轉(zhuǎn)化克隆。
2、通過對轉(zhuǎn)基因后代的PCR檢測、GUS組織化學染色、Westernblotting檢測以及結(jié)合稻瘟菌接種實驗,獲得了攜帶Pi2
3、-AcV5基因且有抗病功能的轉(zhuǎn)基因植株,同時驗證了前期創(chuàng)制的Piz-t-CHA純合株系。
3、采用常規(guī)雜交育種技術(shù)將含有Piz-t-CHA和Pi2-AcV5的T1代植株進行有性雜交,結(jié)合PCR擴增和Western blotting檢測,獲得了同時攜帶Pi2-AcV5基因和Piz-t-CHA基因的雜種F1代植株,實現(xiàn)兩個等位抗性基因的聚合。
本研究創(chuàng)制的材料攜帶蛋白標簽,這為從蛋白水平上研究抗病基因功能機制奠定了重要基
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