1、本文以典型農(nóng)藥類環(huán)境激素甲草胺、阿特拉津?yàn)閷?duì)象，選用鯽魚(yú)為模式生物，研究不同劑量、尤其是低劑量甲草胺、阿特拉津暴露對(duì)鯽魚(yú)的生殖、內(nèi)分泌和免疫功能的影響。試驗(yàn)設(shè)計(jì)甲草胺和阿特拉津的暴露濃度為：1/8、1/16、1/64、1/256、1/1024、1/4000LC50，采用半靜態(tài)水體染毒方法，試驗(yàn)期間每天更換一半染毒溶液，以確保暴露濃度恒定不變，持續(xù)染毒2個(gè)月。應(yīng)用分子生態(tài)毒理學(xué)等研究方法及體內(nèi)、體外相結(jié)合手段，開(kāi)展環(huán)境激素作用機(jī)理和劑量-

2、效應(yīng)關(guān)系研究，嘗試建立低濃度暴露生態(tài)毒理學(xué)研究方法體系，尋找水環(huán)境污染的早期預(yù)報(bào)的生物標(biāo)志物，為環(huán)境激素的生態(tài)和健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下： 1、低劑量甲草胺及阿特拉津暴露可抑制鯽魚(yú)的肝臟和精巢的生長(zhǎng)、發(fā)育，使性腺指數(shù)和肝腺指數(shù)明顯下降，作用影響呈非單調(diào)劑量效應(yīng)關(guān)系。觀察組織切片發(fā)現(xiàn)，甲草胺及阿特拉津暴露可損傷鯽魚(yú)肝臟細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使肝臟細(xì)胞出現(xiàn)空泡、壞死、細(xì)胞腫大、胞質(zhì)疏松等病理變化；并破壞鯽魚(yú)精巢結(jié)構(gòu)，

3、影響其生殖能力，具有生殖毒性。 2、低劑量甲草胺及阿特拉津暴露對(duì)鯽魚(yú)肝臟谷胱甘肽(GSH)和激素代謝關(guān)鍵酶[谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)]活性的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，甲草胺及阿特拉津?qū)ι鲜龈鱾€(gè)酶系產(chǎn)生一定的干擾，呈現(xiàn)非單調(diào)劑量效應(yīng)關(guān)系。GST和UDPGT活性及GSH含量對(duì)甲草胺、阿特拉津暴露均較敏感，這些指標(biāo)從分子水平上反映了污染物對(duì)魚(yú)體肝細(xì)胞的損傷，影響鯽魚(yú)體內(nèi)血清激素的平衡，造成內(nèi)分

4、泌系統(tǒng)的干擾危害，引起一系列的生理生化反應(yīng)。 3、采用放射免疫技術(shù)，研究低劑量甲草胺和阿特拉津暴露對(duì)鯽魚(yú)性激素[17β-雌二醇(E2)、睪酮(T)]及甲狀腺激素[促甲狀腺激素(TSH)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)]的影響。結(jié)果表明，甲草胺可使鯽魚(yú)體內(nèi)的血清激素E2、TSH和T3水平上升，而T的水平下降。阿特拉津可使E2和T3水平上升，而對(duì)T及TSH沒(méi)有顯著影響。研究顯示，鯽魚(yú)體內(nèi)血清性激素E2/T的比值是一種可以有效地指示污染水體

5、中這兩種農(nóng)藥類環(huán)境激素對(duì)魚(yú)類的內(nèi)分泌干擾毒性的生物標(biāo)志物。 4、鯽魚(yú)UDPGT作為E2激素代謝關(guān)鍵酶，在UDPGT受明顯抑制的情況下，無(wú)法代謝體內(nèi)產(chǎn)生的E2，使得E2得以在體內(nèi)累積，表現(xiàn)為明顯負(fù)相關(guān)的趨勢(shì)。并且GST在調(diào)節(jié)甲狀腺激素水平的過(guò)程中起重要作用，隨著甲草胺及阿特拉津的染毒濃度增加GST酶活力下降而T3水平則持續(xù)上升。鯽魚(yú)肝臟激素代謝關(guān)鍵酶的活性的改變，可影響鯽魚(yú)體內(nèi)激素的水平，表明內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的機(jī)制。 5、研

6、究建立測(cè)定鯽魚(yú)卵黃蛋白原的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。結(jié)果表明，鯽魚(yú)VTG為二個(gè)150、160kda的同源二聚體。低劑量的甲草胺和阿特拉津都能夠誘導(dǎo)雄性鯽魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生卵黃蛋白原(VTG)。經(jīng)低劑量甲草胺染毒后，鯽魚(yú)體內(nèi)VTG總體呈現(xiàn)為倒“U”型。而經(jīng)阿特拉津誘導(dǎo)的鯽魚(yú)體內(nèi)的VTG呈現(xiàn)為不規(guī)則的波動(dòng)，無(wú)明顯劑量效應(yīng)關(guān)系，對(duì)于鯽魚(yú)而言，阿特拉津表現(xiàn)出內(nèi)分泌干擾活性弱于甲草胺。并且雄魚(yú)體內(nèi)的VTG積累到一定程度以后，能導(dǎo)致肝、腎等各種組織病變。

7、 6、提取鯽魚(yú)血液總DNA，通過(guò)RAPD試驗(yàn)篩選出合適的引物，結(jié)果表明，低劑量甲草胺和阿特拉津暴露對(duì)鯽魚(yú)DNA有損傷作用，可引起鯽魚(yú)DNA序列發(fā)生變化，使DNA片斷缺失或增加，并且基因多態(tài)性增加，存在一定的至突變性，呈非單調(diào)劑量.效應(yīng)關(guān)系。 7、從鯽魚(yú)血液中分離淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)，采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法開(kāi)展對(duì)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)活性的影響實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，兩種環(huán)境激素對(duì)淋巴細(xì)胞活性的抑制作用存在較明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，甲草胺和阿特拉

8、津?qū)α馨图?xì)胞的半數(shù)抑制濃度分別為27.7±7.6μg/L和97.6±26.4μg/L。兩種環(huán)境激素對(duì)鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甲草胺在濃度達(dá)到7μg/L時(shí)就對(duì)淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生明顯的抑制作用，而阿特拉津則在濃度達(dá)到50μg/L時(shí)才對(duì)淋巴細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制作用。 8、從鯽魚(yú)頭腎中分離純化得到巨噬細(xì)胞，體外培養(yǎng)，用甲草胺和阿特拉津染毒。結(jié)果表明，甲草胺和阿特拉津?qū)奘杉?xì)胞的半數(shù)抑制濃度分別為68.2±7.1μG/L和153.9

9、±23.5μg/L。甲草胺和阿特拉津?qū)a魚(yú)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)活性的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種環(huán)境激素均可抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)活性，呈非單調(diào)劑量-效應(yīng)關(guān)系。 9、甲草胺和阿特拉津?qū)?xì)胞酶活的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，兩種環(huán)境激素對(duì)淋巴細(xì)胞的乳酸脫氫酶(LDH)酶活和巨噬細(xì)胞的LDH與酸性磷酸酶(ACP)酶活的抑制作用表現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。由此可推測(cè)，甲草胺和阿特拉津?qū)?xì)胞酶活的抑制效應(yīng)可能是其對(duì)鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞