1、CDPKs是目前所知Ca2+信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中重要成員之一，參與調(diào)節(jié)了植物生長發(fā)育的許多重要過程。為了研究CDPKs在小麥成熟胚脫分化過程中的作用，本研究以離體小麥（豫麥18）成熟胚為材料，2，4-D處理0、2、6、12、24和72h，提取RNA，利用Affymetrix基因芯片技術(shù)檢測各時點基因的表達信號，分析其中cdpks及其相關(guān)基因的差異表達，并選擇其中關(guān)鍵基因進行real time-PCR驗證，以期闡明cdpks在此過程中的可能作

2、用。 研究結(jié)果表明：在含有61127個探針組，代表了55085個基因的小麥基因組表達芯片上，發(fā)生有意義表達變化的基因共約有15000個，有15個CDPKs基因在小麥成熟胚脫分化過程中發(fā)生了意義變化，其中上調(diào)表達基因12個，上調(diào)2～7．5倍，下調(diào)表達基因2個，下調(diào)3～6．1倍，在不同時點有上調(diào)又有下調(diào)的1個，表明這些基因產(chǎn)物可能參與調(diào)控了脫分化的進程。根據(jù)已知CDPKs生物功能和它們表達變化趨勢以及這些變化趨勢與脫分化過程中的吻合

3、程度分析，推測CPK2A、CPK2B，CPK6和Os12g0169800（BQ280973）參與了小麥成熟胚脫分化過程的啟動和愈傷組織的形成。 為進一步研究cdpks及其相關(guān)基因的表達與小麥成熟胚脫分化進程的關(guān)系，我們從芯片檢測結(jié)果中共檢測到CDPK靶基因及上游基因45個，分析表明這些基因在各時點表達的趨勢與CDPKs基因的表達趨勢基本一致；通過對比cdpks（CA654806和BQ280973）與14-3-3蛋白基因（AF54

4、8740．1）和質(zhì)膜H+-ATPase基因（AY543630．1，又稱hal）在成熟胚脫分化過程中各時點的表達趨勢，本文初步確定了Ca2+轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中幾個重要成員作用的先后次序：14-3-3蛋白→CDPKs基因（CA654806和BQ280973）→質(zhì)膜H+-ATPase。 通過對BQ280973及其下游靶基因質(zhì)膜H+-ATPase基因hal進行Real Time PCR檢測，我們發(fā)現(xiàn)：一方面這2個基因在成熟胚脫分化過程中有著活躍

5、的表達變化，說明它們參與了小麥成熟胚的脫分化進程；另一方面Real Time PCR檢測結(jié)果表明在脫分化的前期（6 h）它們的基因拷貝數(shù)達到最大值，暗示BQ280973和PM H+-ATPase參與生長素（2，4-D）誘導(dǎo)的脫分化過程的啟動。同時這與芯片檢測結(jié)果比較一致，表明該基因芯片結(jié)果可靠。 本研究利用高通量的小麥基因芯片，在基因轉(zhuǎn)錄水平分析了cdpks以及其上下游相關(guān)基因在小麥成熟胚脫分化過程中的表達變化，首次將CDPKs