1、對羥基苯丙酮酸雙加氧酶（HPPD）是酪氨酸分解代謝過程第二步所需的酶，它催化對羥基苯丙酮酸轉(zhuǎn)化為尿黑酸。在植物體內(nèi)，尿黑酸是維生素E和質(zhì)體醌的前體，所以HPPD又間接控制著這兩類物質(zhì)的合成。三酮類、吡唑類和異惡唑類這三類除草劑家族以HPPD為靶位點(diǎn)，競爭性抑制HPPD酶活，造成植物白化并死亡。同時(shí)，抗除草劑的轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物也引起了人們廣泛的興趣和關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，黃連HPPD對吡唑類除草劑DTP具有一定抗性。
　　 水稻（Oryza

2、salivaL.）是作為單子葉遺傳轉(zhuǎn)化的模式植物為其它禾本科作物基因轉(zhuǎn)化和基因調(diào)控研究奠定了基礎(chǔ)。近十幾年水稻基因的研究發(fā)展迅速，部分品種水稻完成了全基因組草圖測序并通過使用轉(zhuǎn)基因技術(shù)獲得了大量穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因水稻植株。人們試圖將一些有用的基因轉(zhuǎn)入水稻，用于研究在單子葉模式植物中的表達(dá)。
　　 本研究構(gòu)建了具有除草劑抗性的Cjhppd基因的單子葉植物表達(dá)載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化水稻，經(jīng)PCR檢測初步驗(yàn)證了Cjhppd基因已導(dǎo)入

3、水稻。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 1.構(gòu)建了單子葉植物表達(dá)載體，該載體中含有Cjhppd基因片段、玉米泛素的啟動子Ubi、選擇性標(biāo)記基因Hpt。
　　 2.用日本晴水稻種子誘導(dǎo)的愈傷組織作為轉(zhuǎn)化的受體材料，通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Cjhppd基因轉(zhuǎn)入水稻，共培養(yǎng)189塊日本晴水稻愈傷組織，三次篩選繼代培養(yǎng)后，獲得76個(gè)抗性愈傷組織，抗性愈傷組織產(chǎn)生率為40.2％，其中33個(gè)抗性愈傷組織分化出再生植株，抗性植株轉(zhuǎn)化率為17.5

4、％。
　　 3.提取轉(zhuǎn)基因水稻基因組DNA，經(jīng)PCR檢測初步驗(yàn)證了Cjhppd基因已導(dǎo)入水稻。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻獲得了轉(zhuǎn)基因植株33株，其中經(jīng)PCR檢測陽性株數(shù)為8株，陽性轉(zhuǎn)化效率為24.2％。
　　 4.水稻葉片除草劑DTP抗性分析的初步結(jié)果顯示，在DTP脅迫下轉(zhuǎn)基因水稻葉片白化程度都明顯低于野生型的水稻。轉(zhuǎn)基因水稻葉片中葉綠素a、葉綠素b、類胡蘿卜素含量都明顯高于未轉(zhuǎn)化的野生型水稻。初步判斷，轉(zhuǎn)Cjhppd基因水稻表現(xiàn)出