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![家蠶BmL130基因的表達(dá)分析及組織定位研究.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/8f910d1c-31d1-4aea-9647-50196fcbc68a/8f910d1c-31d1-4aea-9647-50196fcbc68a1.gif)
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1、我們從本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的家蠶蛹cDNA文庫(kù)中篩選得到一條新的cDNA序列,經(jīng)NCBI比對(duì)分析后確定其為一未知基因,命名為BmL130(Bomby.moriL130)。BmL130基因長(zhǎng)為135.bp,開放閱讀框大小為96.bp,預(yù)測(cè)該基因編碼322個(gè)氨基酸殘基,分子量大小為37.2.kD,等電點(diǎn)為6.40。從GenBank等數(shù)據(jù)庫(kù)中利用Blast檢索,發(fā)現(xiàn)與Bomby.mor.EST序列同源性較高的均為一些假想蛋白,這些蛋白功能未知。
2、> 我們根據(jù)cDNA序列的ORF框設(shè)計(jì)上下游引物,PCR擴(kuò)增后經(jīng)Bam.I和Xh.I雙酶切,插入融合表達(dá)載體pET-28a(+)的相應(yīng)酶切位點(diǎn),成功構(gòu)建重組融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,經(jīng)PCR、酶切鑒定以及測(cè)序分析證實(shí)重組正確。IPTG誘導(dǎo)后裂解菌作SDS-PAGE分析,在4.kD處有一濃集特異性蛋白條帶,重組蛋白以包涵體的形式表達(dá),通過(guò)親和層析純化了重組蛋白,并使用該重組蛋白免疫新西蘭大白兔制備多
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