1、隨著轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程的推進(jìn),越來越多的轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)入食品和醫(yī)藥領(lǐng)域,因此建立快速有效的檢測技術(shù)已成為世界各國轉(zhuǎn)基因授權(quán)評估機(jī)構(gòu)所面臨的巨大挑戰(zhàn)。
　　 本論文利用多重PCR和微流體芯片技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因棉花外源基因的檢測體系。該體系通過多重PCR技術(shù)高通量擴(kuò)增棉花外源基因的同時(shí)運(yùn)用微流體芯片對反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行特異性地檢測。本論文根據(jù)轉(zhuǎn)基因數(shù)據(jù)庫中絕大多數(shù)植物的外源基因序列設(shè)計(jì)探針1032條,制備具有篩選基因、目的基因、交聯(lián)結(jié)構(gòu)序列、

2、特異性結(jié)構(gòu)序列和16種經(jīng)濟(jì)作物種屬內(nèi)參基因的綜合性基因芯片。多重PCR技術(shù)的關(guān)鍵在于多重PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化,本文從多重引物組合、PCR反應(yīng)體系、PCR反應(yīng)條件這三個(gè)方面對轉(zhuǎn)基因棉花多重PCR反應(yīng)進(jìn)行優(yōu)化,建立了擴(kuò)增效率較高的轉(zhuǎn)基因棉花中棉41的六重PCR反應(yīng)體系,優(yōu)化后的體系為Hotstar Taq DNA聚合酶用量為1.25 U/50μl,鎂離子的終濃度為3.5 mM,dNTP的終濃度為400μM,BSA(10mg/ml)的加入量為

3、2μl,選取58℃為反應(yīng)擴(kuò)增的退火溫度。利用優(yōu)化的多重PCR體系進(jìn)行熒光標(biāo)記后與芯片雜交特異性地檢測到轉(zhuǎn)基因棉花中棉41中的外源基因啟動(dòng)子CaMV35S、終止子TNOS、報(bào)告基因NPTII和抗蟲基因Cry1Ac。本論文建立了六重PCR偶聯(lián)微流體芯片高通量檢測轉(zhuǎn)基因棉花的體系,為轉(zhuǎn)基因植物的檢測提供技術(shù)參考。
　　 棉花是適度耐鹽的非鹽生植物,但高濃度的鹽離子仍會(huì)嚴(yán)重影響棉花的產(chǎn)量和棉纖維的品質(zhì)。通過土地改良來改善日益加劇的土地鹽

4、堿化問題因效益和成本問題而擱置,因此通過轉(zhuǎn)基因的方式提高作物的耐鹽能力是目前解決土地鹽堿化問題的有效方法?？果}棉花的培育已成為棉花轉(zhuǎn)基因研究領(lǐng)域的熱點(diǎn),需要建立相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)以滿足抗鹽轉(zhuǎn)基因棉花涌入市場的趨勢,但棉花在鹽脅迫下的分子調(diào)控機(jī)制還不是很透徹,因此深入研究棉花的耐鹽調(diào)控機(jī)理為抗鹽脅迫轉(zhuǎn)基因棉花的培育提供候選基因。
　　 本論文開展了鹽脅迫下苗期轉(zhuǎn)基因棉花中棉41和中棉23的表達(dá)譜研究,對鹽處理前后的棉花幼苗差異表