1、水稻作為我國最主要的糧食作物之一，是我國糧食安全和農業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要戰(zhàn)略資源。長期以來，稻瘟病、紋枯病、白葉枯病等真菌性或者細菌性病害嚴重限制了水稻的產量和品質。通過基因工程克隆抗病基因并與常規(guī)育種技術相結合培育抗病新品種是現代作物遺傳改良的有效途徑。本研究擬從辣椒中分離出的廣譜抗病基因(抗菌蛋白、硫素蛋白、親環(huán)蛋白、鐵氧還蛋白、非特異性脂轉移蛋白)與強誘導型啟動子LLJRP1(Late Upregulated in Response

2、 toHyaloperonospora parasitica)結合起來轉化水稻日本晴，獲得轉基因植株，并進行稻瘟病的初步抗性分析，從中篩選具有較強抗稻瘟病的轉基因新品種，為實現水稻抗病與高產的有機統(tǒng)一打下一定的基礎。主要結果如下：
　　 1、利用Gateway克隆技術構建了CaAPs(抗菌蛋白)、CaThs(硫堇蛋白)、CaCyPs(親環(huán)蛋白)，CaFds(鐵氧還蛋白)、CansLTPs(非特異性脂轉移蛋白)的植物表達載體，并進

3、行測序驗證，結果表明上述5個辣椒PRs基因已成功構建到pMDC—32植物表達載體中，且目標基因序列與原序列完全一致；
　　 2、以日本晴成熟種子為材料，通過農桿菌介導的水稻遺傳轉化方法，將上述5個辣椒PRs基因轉化粳稻品種日本晴中，并初步統(tǒng)計其轉化率以及陽性率。結果表明，成熟日本晴種子的愈傷誘導率大約在80％—90％之間，轉化率大約在9％—15％，其中CaAPs篩選開始時的愈傷數約為263個，分化苗數為31株，轉化率約11．79

4、％；CaThs篩選開始時的愈傷數約為235個，分化苗數為25株，轉化率約為10．64％；CaCyPs篩選開始時的愈傷數約為187個，分化苗數為17株，轉化率約為9．09％；CaFds篩選開始時的愈傷數約為206個，分化苗數為23株，轉化率約為11．17％；CansLTPs篩選開始時的愈傷數約為157個，分化苗數為17株，轉化率約為10．83％。提取水稻基因組DNA，進行PCR驗證，計算轉基因水稻的陽性率，其中，獲得CaAPs陽性植株30

5、株，陽性率約為96．77％；獲得CaThs陽性植株株25株，陽性率約為100％，獲得CaCyPs陽性植株17株，陽性率約為100％，獲得CaFds陽性植株23株，陽性率約為100％；獲得CansLTPs陽性植株15株，陽性率約為88．24％。由于栽培管理以及病菌侵染等因素，部分轉基因苗死亡。最后，將28株CaAPs陽性植株，23株CaThs陽性植株，15株CaCyPs陽性植株，20株CaFds陽性植株，15株CansLTPs陽性植株移栽

6、大田，收獲T1代種子；
　　 3、對上述T1代轉基因植株進行稻瘟菌guy1的接種處理，通過RT—PCR分析上述CaAPs，CaThs，CansLTPs基因在水稻中的表達情況，并進行轉基因植株的表型分析及抗性鑒定。RT—PCR結果分析發(fā)現，外源抗CaAPs，CaThs，CansLTPs基因在稻瘟菌未接種和接種的條件下，都有不同程度的表達，但在接種后表達量都有所提高。與接種稻瘟菌的野生型日本晴植株相比，外源CaAPs，CaThs，C

7、ansLTPs基因這三個轉基因水稻的發(fā)病程度明顯較輕，表明對稻瘟病的抗性有不同程度的提高。這些結果表明，辣椒外源防衛(wèi)反應基因轉化水稻日本晴在一定程度上提高了水稻對稻瘟菌的抗病性，此外。又進一步驗證了前人的研究結果：不同高等植物里含有一套相似的防衛(wèi)反應基因。
　　 4、擬南芥LURP1啟動子在水稻中的表達分析發(fā)現，在雙子葉模式植物擬南薺抗病中起重要調節(jié)作用的LURP1啟動子同樣可以在水稻中誘導抗性基因的表達，這說明單子葉和雙子葉植