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文檔簡(jiǎn)介
1、暗紋東方鲀(Takifugu obscurus)俗稱河鲀,屬硬骨魚(yú)綱(Osteichthyes)鲀形目(Tetraodontiformes)鲀科(Tetraodontidae)東方鲀屬(Fugu),是一種重要的洄游性魚(yú)類。因其肉質(zhì)細(xì)嫩,肉味腴美,營(yíng)養(yǎng)豐富,享有“長(zhǎng)江三鮮之一”的美譽(yù)。暗紋東方鲀是長(zhǎng)江中一種具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的漁業(yè)資源,近年來(lái),由于水環(huán)境污染和過(guò)度捕撈等原因,暗紋東方鲀資源急劇下降,目前已不能形成漁汛,這必然會(huì)給暗紋東方鲀種
2、質(zhì)資源產(chǎn)生不利的影響。本文采用了微衛(wèi)星和序列相關(guān)擴(kuò)增多態(tài)性兩種分子標(biāo)記,研究了1個(gè)暗紋東方鲀長(zhǎng)江捕撈群體、1個(gè)放流群體和2個(gè)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性狀況及其遺傳結(jié)構(gòu)。論文主要研究結(jié)果如下:
1.研究了紅鰭東方鲀微衛(wèi)星標(biāo)記對(duì)暗紋東方鲀的適用性。利用16對(duì)紅鰭東方鲀微衛(wèi)星引物對(duì)暗紋東方鲀基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并優(yōu)化PCR條件,結(jié)果表明10對(duì)微衛(wèi)星引物(占總數(shù)62.5%)能擴(kuò)增出特異性條帶,且都表現(xiàn)出多態(tài)性,可用于暗紋東方鲀?nèi)?/p>
3、體遺傳多樣性分析。
2.選用10對(duì)暗紋東方鲀和10對(duì)經(jīng)篩選的紅鰭東方鲀微衛(wèi)星引物,對(duì)4個(gè)暗紋東方鲀?nèi)后w(1個(gè)長(zhǎng)江捕撈江群體,1個(gè)放流群體和2個(gè)養(yǎng)殖群體)進(jìn)行了遺傳多樣性分析。結(jié)果顯示,20對(duì)微衛(wèi)星引物在4個(gè)群體中共擴(kuò)增得到113個(gè)等位基因,等位基因數(shù)在2-10之間,平均每個(gè)位點(diǎn)得到5.65個(gè)等位基因。各個(gè)群體的平均等位基因數(shù)(A)為4.95-5.50,平均觀測(cè)雜合度(Ho)為0.6867-0.7617、平均期望雜合度(He
4、)為0.6530-0.7000、平均多態(tài)信息含(PIC)0.6013-0.6384。群體間遺傳分化系數(shù)(Fst)為0.0406,基因流(Nm)值為5.9056,表明4個(gè)群體遺傳分化程度微弱,存在一定程度的基因交流。4個(gè)群體間的遺傳距離為0.0880-0.1519,采用UPGMA法對(duì)4個(gè)群體進(jìn)行聚類分析,結(jié)果表明上海養(yǎng)殖群體單獨(dú)聚為一類,其余3個(gè)群體聚為另一類。
3.利用正交設(shè)計(jì)L16(45)對(duì)影響暗紋東方鲀SRAP-PCR
5、反應(yīng)的5個(gè)因素(Mg2+、Taq酶、dNTPs、模板DNA、引物)在4個(gè)水平上進(jìn)行正交組合,確立了暗紋東方鲀SRAP反應(yīng)最佳體系:20μL的PCR體系中含有Mg2+1.5mmol/L、Taq酶0.5 U、模板DNA75 ng、dNTPs0.15 mmol/L、引物0.2μmol/L。利用30個(gè)暗紋東方鲀樣本對(duì)該體系進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果表明該體系穩(wěn)定可靠。
4.利用上述反應(yīng)體系,從49對(duì)引物組合中篩選出18對(duì)擴(kuò)增條帶清晰、穩(wěn)定的引
6、物組合首次對(duì)4個(gè)暗紋東方鲀?nèi)后w進(jìn)行了遺傳多樣性分析。共獲得231個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)位點(diǎn)數(shù)為156個(gè),占總位點(diǎn)數(shù)百分比為67.53%。4個(gè)群體內(nèi)多態(tài)位點(diǎn)比例為54.98%-58.87%,群體的Nei's基因多樣性指數(shù)(H)為0.1992-0.2005,群體Shannon多樣性指數(shù)(I)為0.2953-0.3016,群體間基因流(Nm)為4.1291。長(zhǎng)江捕撈群體的多態(tài)位點(diǎn)比例、基因多樣性指數(shù)、Shannon多樣性指數(shù)均略高于其它三個(gè)群體。采
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