1、紋枯病菌(Rhizoctonia solani)是水稻紋枯病的病原菌,由于在自然狀態(tài)下水稻缺乏有效的抗源,該病害有越來越嚴(yán)重的趨向,部分地區(qū)的危害程度甚至超過了稻瘟病。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗紋枯病種質(zhì)資源的方法已被廣泛采用。
　　 為了挖掘和使用不同類型的基因資源,本課題組之前從稻瘟病菌中克隆了一個幾丁質(zhì)酶(CHI)基因。實驗表明該基因編碼產(chǎn)物具有較強的活性。此外,紋枯病菌與菌核病菌同為草酸產(chǎn)生菌,課題組

2、之前證實了轉(zhuǎn)枯草芽孢桿菌的草酸脫羧酶基因(OXD)的模式植物擬南芥增強了對核盤菌的抗性。同時,有報道表明,將幾丁質(zhì)酶基因和葡聚糖酶基因同時轉(zhuǎn)入植物中,可以進(jìn)一步提高植物對病原菌的抗病性。據(jù)此,本研究分別從稻瘟菌ku-70,枯草芽孢桿菌和水稻品種日本晴中克隆了稻瘟菌幾丁質(zhì)酶基因(CHI),草酸脫羧酶基因(OXD),水稻葡聚糖酶(GLU)基因用于轉(zhuǎn)基因水稻的研究。
　　 用幾丁質(zhì)酶基因、葡聚糖酶基因和草酸脫羧酶基因,分別構(gòu)建了三個植

3、物表達(dá)載體pCAMBIA1301-ubi-chi、pCAMBIA1301—ubi-glu和pCAMBIA1301-ubi-oxd。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法,將稻瘟菌幾丁質(zhì)酶基因和枯草芽孢桿菌草酸脫羧酶基因轉(zhuǎn)化到水稻品種明恢86和kitaaki中。經(jīng)提取轉(zhuǎn)基因水稻基因組DNA的PCR驗證和GUS染色鑒定,結(jié)果表明,兩個基因成功被導(dǎo)入水稻植株中。提取轉(zhuǎn)基因水稻RNA經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增,進(jìn)一步證實目的基因在水稻植株中成功轉(zhuǎn)錄。通過對部分T1代的轉(zhuǎn)