1、本研究以RT-白絮(白)、棕絮1號(hào)(棕)及棕1—61(深棕)為試驗(yàn)材料,利用化學(xué)顯色法及紫外分光光度法對(duì)3種材料不同發(fā)育時(shí)期纖維色素物質(zhì)及相對(duì)含量變化趨勢(shì)進(jìn)行了研究；利用基因工程方法構(gòu)建CHS及F3’5’H基因的ihpRNA及amiRNA干擾載體并通過(guò)花粉管通道法轉(zhuǎn)化棕色棉以進(jìn)行基因功能驗(yàn)證；以RT-白絮、棕1-61為試驗(yàn)材料,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果分析類(lèi)黃酮合成途徑轉(zhuǎn)錄因子基因CPC、TT8及TTG1基因在不同纖維發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量

2、差異,試圖從分子水平解釋彩色棉纖維品質(zhì)及色素物質(zhì)形成的關(guān)系。本研究主要結(jié)論如下:
　　 1.通過(guò)RT-白絮、棕絮1號(hào)及棕1-61不同發(fā)育階段纖維及葉、花、蕾甲醇提取液的NaOH、鹽酸.鎂粉顯色反應(yīng)和紫外光譜掃描,綜合分析以上結(jié)果得出結(jié)論認(rèn)為RT-白絮、棕絮1號(hào)及棕1-61不同發(fā)育階段未成熟纖維中均含有黃酮醇或二氫黃酮醇,成熟纖維中則不含有；纖維發(fā)育各階段相關(guān)色素物質(zhì)含量比較結(jié)果:棕1-61＞棕絮1號(hào)＞RT-白絮,其中+28DPA

3、后白色棉與棕色棉色素相關(guān)物質(zhì)含量基本一致,棕1-61+60DPA棉纖維色素相關(guān)物質(zhì)含量高于棕絮1號(hào)及RT-白絮；白色棉各時(shí)期色素相關(guān)物質(zhì)含量差異較小,棕色棉各時(shí)期色素相關(guān)物質(zhì)含暈變化趨勢(shì)一致,均在+17DPA達(dá)到最大,棕絮1號(hào)在+60DPA最低,棕1-61在+28DPA達(dá)到最低。
　　 2.利用NCBI公布序列信息,設(shè)計(jì)特異引物,獲得了查爾酮合成酶基因CHS及類(lèi)黃酮3’5’羥基化酶基因F3’5’H的mRNA序列全長(zhǎng)；利用pHAN

4、NIBAL載體及棉花纖維發(fā)育特異啟動(dòng)子SCFP,構(gòu)建了由組成型啟動(dòng)子CaMV35S及SCFP共同啟動(dòng)的分別靶向CHS及F3’5’H基因的ihpRNA干擾載體,并通過(guò)花粉管通道法進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。
　　 3.以棉花microRNA序列Ghr—MIR156d作為骨架,利用micrRNA設(shè)計(jì)平臺(tái)WMD-3(http:／／wmd3.weigelworld.org)設(shè)計(jì)了靶向CHS及F3’5’5H基因的amiRNA前體序列,并通過(guò)與植物

5、表達(dá)載體重組連接,構(gòu)建了靶向CHS及F3’5’H基因的anfiRNA干擾載體,并通過(guò)花粉管通道法進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)。
　　 4.通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR分析了3個(gè)不同看家基因.Hitone、Actin及Gbpolyubiquitin在RT-白絮和棕1-61+13、+17、+23、+28DPA纖維樣品中的相對(duì)表達(dá)量的差異,獲得了適用于在+13DNA至+18DPA纖維基因表達(dá)分析的穩(wěn)定內(nèi)參基因Gbpolyubiquitin基因；

6、>　　 5.通過(guò)實(shí)時(shí)定量熒光PCR分析了3個(gè)類(lèi)黃酮合成途徑轉(zhuǎn)錄引子基因CPC、TT8及TTG1在RT-白絮和棕1-61+13、+17、+23及+28DPA纖維樣品中的相對(duì)表達(dá)量差異,CPC及TFG1基因在白色棉纖維發(fā)育各個(gè)時(shí)期表達(dá)量均高于棕色棉,TT8基因在棕色棉纖維發(fā)育各個(gè)時(shí)期表達(dá)量均高于白色棉,結(jié)合RT-白絮及棕1-61纖維品質(zhì)特征,得出結(jié)論認(rèn)為:CPC、TT8及TTG1可能形成類(lèi)似MYB-bHLH—WD40復(fù)合體共同調(diào)控天然棕色