1、<p>　　快速檢測食品中微生物方法的進展</p><p>　　隨著人們生活水平不斷提高，食品安全問題越來越受到人們的重視，微生物對食品的污染問題也相應地備受關注。在食品生產、加工、儲存、運輸、銷售等各個環(huán)節(jié)中都有污染微生物的可能。一旦污染，微生物將大量繁殖而引起食品腐敗變質，或導致食源性感染和食物中毒。特別是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，可導致人類感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物

2、對人類的威脅越來越大。傳統(tǒng)的檢驗方法，主要包括形態(tài)檢查和生化方法，其準確性、靈敏性均較高，但涉及的實驗較多、操作煩瑣、需要時間較長、準備和收尾工作繁重，而且要有大量人員參與。所以，準確、省時、省力和省成本的快速檢驗方法是社會的迫切需要。本文對食品中微生物的快速檢測方法進展情況進行綜述，以利于對食品進行篩選和檢測，最終達到預防腸道傳染病和食物中毒的發(fā)生的目的。 </p><p><b>　　1、即用型紙片

3、法 </b></p><p>　　3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物測試片，可分別檢測菌落總數(shù)、大腸菌群計數(shù)、霉菌和酵母計數(shù)。由RCP Scientific Inc 公司開發(fā)上市的Regdigel系列，除上述項目外還有檢測乳桿菌、沙門菌、葡萄球菌的產品，這兩個系列的產品與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測餐具的表面，操作簡便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符

4、合率高，已經(jīng)被列為國標方法。使用時應正確掌握操作技術和判斷標準，從而達到理想的檢測效果。美國3M公司生產的PF（Petrifilm）試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細菌恢復的缺陷。在大腸菌群檢測方面，國標方法報告的是MPN值而不是每克食品中的大腸菌群數(shù)，PF法則可以得出精確數(shù)據(jù)。霉菌快速檢驗紙片，應用于食品檢驗中的霉菌具有操作簡便，僅需36℃培養(yǎng)，不需要低溫設備；快速，僅需2 d就可觀察結果

5、，比現(xiàn)在的國家標準檢驗方法縮短3 d～5 d，大大提高了工作效率。紙片法與國標法在霉菌檢出率上差異無顯著性，且菌落典型，易判定。紙片熒光法利用細菌產生某些代謝酶或代謝產物的特點而建立的一種酶</p><p>　　2、選擇、鑒定用培養(yǎng)基法 </p><p>　　在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應底物、抗體、熒光反應底物、酶反應底物等，可使目標培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司

6、的BP+RPF（兔血漿+纖維蛋白原）培養(yǎng)基，可在24 h內鑒定金黃色葡萄球菌。Merk公司的chromocult Coliform Agar培養(yǎng)基上，大腸桿菌為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落。 </p><p><b>　　3、免疫學技術 </b></p><p>　　免疫學技術通過抗原和抗

7、體的特異性結合反應，再輔以免疫放大技術來鑒別細菌。免疫方法的優(yōu)點是樣品在進行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術進行篩選。由于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時間內達到檢出度，抗原和抗體的結合反應可在很短時間內完成。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提高環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率。膠體金免疫層析法能快速、靈敏檢測金黃色葡萄球菌，應用膠體金免疫層析法檢測食品中的沙門菌，簡便

8、快速，無需特殊儀器設備，適合現(xiàn)場檢測之用。ATP生物發(fā)光法是近年發(fā)展較快的一種用于食品生產加工設備潔凈度檢測的快速檢測方法。利用ATP生物發(fā)光分析技術和體細胞清除技術，測量細菌ATP和體細胞ATP， 細菌ATP的量與細菌數(shù)成正比，用ATP本論文由無憂論文網(wǎng)www.51lunwen.com整理提供生物發(fā)光分析技術檢測肉類食品細菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場衛(wèi)生學檢測，都能夠達到快速適時的目標。微型自動熒光酶標分析法（mini VIDAS）是利

9、用酶聯(lián)熒光免疫分析技術，通過抗原抗體特異反應，分離出目標菌，由特殊儀器根據(jù)熒光的強弱自動判斷樣品的</p><p>　　4、細菌直接計數(shù)法 </p><p>　　主要包括流式細胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM）和固相細胞計數(shù)（solid phase cytometry，SPC）法。FCM通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細胞在激光束的照射下

10、產生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號的強度則代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度，由此可通過儀器檢測散射光信號和熒光信號來估計微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細胞計數(shù)具有高度的敏感性，可同時對目的菌進行定性和定量。目前已經(jīng)建立了細菌總數(shù)、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗方法。固相細胞計數(shù)可以在單個細胞水平對細菌進行快速檢測。濾過樣品后，存留的微生物在濾膜上進行熒光標記，采用激光掃描設備自

11、動計數(shù)。每個熒光點可直觀地由通過計算機驅動的流動臺連接到ChemScan上的落射熒光顯微鏡來檢測，尤其對于生長緩慢的微生物，檢測用時短使該方法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計數(shù)法。 </p><p>　　5、全自動微生物分析系統(tǒng)（AMS） </p><p>　　AMS是一種由傳統(tǒng)生化反應及微生物檢測技術與現(xiàn)代計算機技術相結合，運用概率最大近似值模型法進行自動微生物檢測的技術，可鑒定由環(huán)境、原料及產品中分

12、離的微生物。AMS僅需4 h～18 h即可報告結果，以常規(guī)法鑒定細菌，只能得到是或不是某種菌，要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗，而AMS則可以直接報告是什么菌。法國生物梅里埃集團公司出品的VitekAMS自動微生物檢測系統(tǒng)屬當今世界上最為先進、自動化程度最高的細菌鑒定儀器之一。Vitek對細菌的鑒定是以每種細菌的微量生化反應為基礎，不同種類的Vitek試卡（檢測卡）含有多種的生化反應孔，可達30種，可鑒定405種細菌。用AMS