1、近年來，我國土壤石油污染問題日益凸現(xiàn)。在石油的開采、加工、運輸過程中，大量的石油及其加工品進入土壤，造成土壤的石油污染，給人類乃至整個生物圈帶來巨大的危害，已成為世界性的環(huán)境問題。在對石油污染治理的研究中，生物修復作為一項潛在的高效、低成本的清潔技術正日益受到重視。近十余年來，國際上對生物修復的研究十分活躍，有些國家已將此技術用于污染土壤的實際修復，并取得了顯著的成果。
　　 本研究從勝利油田長期開采的油井附近土壤中篩選到3株高

2、效降解菌株DH-5、DH-8和DH-9，培養(yǎng)7d后，對原油的降解率分別為42.39％、40.42％和43.30％;通過形態(tài)學觀察、生理生化鑒定和16S rDNA序列分析，發(fā)現(xiàn)菌株DH-5、DH-8和DH-9分別屬于假單胞菌屬（Pseudomonas sp.）、檸檬酸桿菌屬（Citrobacter sp.）、克雷伯氏菌屬（Klebsiella sp.）。并以常見石油產品和石油中典型烷烴類和芳香烴類化合物為唯一碳源，對3株菌底物利用能力進行

3、了研究，發(fā)現(xiàn)菌株DH-5在長鏈烷烴和環(huán)烷烴中生長較好，DH-8在多環(huán)芳烴中生長較好，而DH-9在低鏈烷烴和環(huán)烷烴中生長較好，3株高效石油降解菌對原油組分的利用的廣譜性依次是DH-5＞DH-9＞DH-8。
　　 以利用烷烴類化合物效果較好的菌株DH-5和DH-9進一步做降解條件的優(yōu)化試驗，通過正交試驗優(yōu)化后，菌株DH-5的最優(yōu)降解條件為初始原油濃度0.5％、氮源濃度500 mg·L-1、磷源濃度50 mg·L-1、精氨酸濃度15

4、mg·L-1、溫度30℃及初始pH7.0，此時原油降解率最高為63.40％;菌株DH-9的最優(yōu)降解條件為初始原油濃度0.3％、氮源濃度400 mg·L-1、磷源濃度150 mg·L-1、天冬氨酸濃度5 mg·L-1、溫度30℃及初始pH7.0，此時原油降解率最高為63.77％，顯著提高了兩株菌株的降油能力。
　　 通過柱層析法分析了正交優(yōu)化前后原油四組分（飽和烴，芳香烴，膠質和瀝青質）的降解效果，發(fā)現(xiàn)在扣除自然降解率后，優(yōu)化前，

5、菌株DH-9對膠質和瀝青質的降解率顯著高于菌株DH-5。優(yōu)化后，菌株DH-5對原油四組分的降解率明顯提高，分別為62.01％、58.86％、46.62％及9.33％;菌株DH-9對四種組分的降解率也有所提高，分別為63.97％、62.03％、37.16％及14.67％，降解能力排序均為:飽和烴＞芳香烴＞膠質＞瀝青質。
　　 為了能夠系統(tǒng)地認識微生物對石油的代謝過程，通過氣相色譜法分析了原油代謝產物中的脂肪酸含量。結果表明:發(fā)酵液

6、中主要的小分子有機酸是乙酸，菌株DH-5和DH-8的發(fā)酵液中還含有C8～C18的長鏈脂肪酸，菌株DH-9的發(fā)酵液中含有C8～C24的長鏈脂肪酸，主要是烷酸和烯酸，所以推測菌株DH-5、DH-8和DH-9的代謝原油的方式可能是單末端氧化和直接脫氫途徑。
　　 測定三株能利用環(huán)己酮的菌株DH-5、DH-9和A-1（本實驗室保藏菌株）的環(huán)己酮降解率，3 d后降解率分別為94.84％，93.60％和94.39％。并通過TLC、FT-IR

7、及GC/MS分析，探討了菌株降解環(huán)己酮的中間代謝產物，發(fā)現(xiàn)了環(huán)己醇、己內酯、鄰苯二甲酸和己二酸，這證實了菌株很可能是在環(huán)己酮單加氧酶的作用下，將環(huán)己酮氧化成ε-己內酯，ε-己內酯在酯酶及脫氫酶的作用下再形成己二酸，隨后己二酸進入脂肪酸的β-氧化途徑。而菌株DH-5代謝產物中還有2，5-二氫呋喃的產生，這預示著一種新型的環(huán)己酮代謝途徑。此外，還成功克隆了菌株DH-5的環(huán)己酮單加氧酶基因（chnB）的片段，為環(huán)己酮單加氧酶功能及石油代謝過程