小反芻獸疫病毒H蛋白的原核表達與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究根據(jù)GenBank收錄的PPRV Nigeria/75/1(1830bp)株H基因全序列，設(shè)計一對引物H-R、H-F，用于擴增PPRV H基因，上游引物引入BamH I限制性內(nèi)切酶位點，下游引物也引入BamH I限制性內(nèi)切酶位點，對pTOP-H質(zhì)粒進行PCR擴增，并克隆至pGM-T載體中，轉(zhuǎn)化E.coli TOP10感受態(tài)細胞，獲得重組質(zhì)粒pGM-T-H，將重組質(zhì)粒經(jīng)BamH I雙酶切產(chǎn)物插入原核表達載體pET-32a(+)，構(gòu)建

2、原核表達載體pET-32a-H，將其轉(zhuǎn)化進BL21(DE3)感受態(tài)細胞中后用IPTG誘導(dǎo)表達，收集菌液進行SDS-PAGE電泳和Western-blotting分析，結(jié)果表明，小反芻獸疫病毒H基因在BL21(DE3)成功表達，所表達融合蛋白的相對分子質(zhì)量約為80ku(目的基因的蛋白分子質(zhì)量為58ku，載體HIS分子質(zhì)量為22ku)，與理論推測的蛋白分子量一致；經(jīng)Western-blotting證明，表達所得蛋白能被小反芻獸疫羊標(biāo)準(zhǔn)陽性血

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