1、本論文試驗部分介紹了3個動物試驗，涉及機體生命過程中3個重要時期（發(fā)育、過敏、感染）胃腸道的健康.前兩個實驗主要研究了大豆苷元對胃腸道發(fā)育和免疫應(yīng)答以及微生物區(qū)系的影響。在第一個動物試驗中，以斷奶仔豬為觀察對象，研究了大豆苷元對斷奶前后胃腸道組織的發(fā)育，并發(fā)現(xiàn)大豆苷元對斷奶仔豬胃壁組織的肥大細胞有顯著抑制作用；此后，文章的第二個動物試驗以O(shè)VA致敏小鼠，建立過敏模型，進一步研究其對肥大細胞的影響，兩個試驗雖然將大豆苷元的功能與肥大細胞聯(lián)

2、系在了一起，但其作用機理還有待進一步研究.文章的第三個動物試驗側(cè)重于腸道免疫學(xué)基礎(chǔ)研究，涉及了目前免疫學(xué)研究熱點TLRs.該動物試驗對一株有毒力的產(chǎn)氣莢膜梭菌感染后，各種TLR及其相關(guān)分子的表達進行了研究，并發(fā)現(xiàn)腸道TLR的作用方式可能與脾臟不同，為以后促進腸道健康研究提供理論基礎(chǔ)。
　　 1.大豆苷元對斷奶仔豬胃腸道消化道發(fā)育的影響
　　 本試驗研究了哺乳期飼喂大豆苷元對仔豬胃腸道組織發(fā)育的影響。3窩新生仔豬，在窩內(nèi)隨

3、機分為兩組：大豆苷元組和對照組，于7、9、11日齡每頭仔豬分別飼喂1、2、3mg大豆苷元-脫脂乳溶液或脫脂乳安慰劑；所有仔豬于21日齡斷奶；14、21、24和35日齡，每窩隨機抽取飼喂大豆苷元和對照組仔豬各一頭屠宰，取胃底部、十二指腸前端、空腸前端進行組織學(xué)觀察.結(jié)果顯示，大豆苷元處理組胃底腺鹽酸細胞顯著多于對照組（P<0.05）；斷奶造成仔豬十二指腸和空腸腸絨毛高度變短，胃底腺增厚速度變快，但大豆苷元對腸絨毛高度和胃底腺厚度都無顯著影

4、響，結(jié)果說明，哺乳期飼喂大豆苷元可能對斷奶仔豬胃底鹽酸細胞發(fā)育有促進作用.
　　 2.大豆苷元對斷奶仔豬胃腸道免疫應(yīng)答的影響
　　 本試驗研究了哺乳期飼喂大豆苷元對斷奶仔豬胃腸道免疫器官重量以及免疫應(yīng)答的影響.3窩新生仔豬，在窩內(nèi)隨機分為兩組：大豆苷元組和對照組，于7、9、11日齡每頭仔豬分別飼喂1mg,2mg、3mg大豆苷元.脫脂乳溶液或脫脂乳安慰劑；所有仔豬于21日齡斷奶；14、21、24和35日齡，每窩隨機抽取飼喂

5、大豆苷元和脫脂乳仔豬各一頭稱重、屠宰、稱量脾臟和胸腺重；取胃底部制成組織切片顯微觀察并統(tǒng)計胃底腺肥大細胞數(shù)量；測定空腸和回腸組織組胺以及血清皮質(zhì)醇.結(jié)果顯示，對照組仔豬脾臟和胸腺重量在斷奶第2周重顯著下降（P<0.05），大豆苷元組胸腺重在斷奶后第2周顯著大于對照組(P<0.05)，脾臟和胸腺重在斷奶前后無顯著變化（P>0.05）；斷奶可短暫引起仔豬胃組織中肥大細胞大量增加，大豆苷元組肥大細胞在斷奶前和斷奶后第3天都顯著少于對照組(P<

6、0.05）；可能由于錯過了最佳觀察時間，仔豬斷奶后第3天和第2周都未見空腸和回腸組胺顯著升高，但斷奶后大豆苷元組回腸組胺含量顯著低于對照組(P<0.05）.結(jié)果說明，哺乳期飼喂大豆苷元可以抑制斷奶造成的胸腺萎縮和肥大細胞大量增殖，減少斷奶仔豬回腸組胺合成。
　　 3.大豆苷元對食物過敏小鼠免疫應(yīng)答的影響
　　 本試驗利用OVA誘導(dǎo)小鼠食物過敏，研究大豆苷元和染料木素對其血清OVA特異性抗體水平和肥大細胞數(shù)量的影響。結(jié)果顯

7、示，致敏組小鼠血清OVA-IgG1滴度劇烈增加，肥大細胞雖沒有顯著變化（P>0.05），但mMCP-7陽性肥大細胞數(shù)量顯著（P<0.05）?？诜蠖管赵腿玖夏舅仫@著降低OVA-IgG1水平，減少了肥大細胞數(shù)量，尤其是mMCP-7陽性肥大細胞的數(shù)量顯著降低（P<0.05）；染料木素對染料木素的抑制作用顯著強于大豆苷元(P<0.05)，結(jié)果說明大豆苷元和染料木素可緩解食物過敏的發(fā)生進程。
　　 4.大豆苷元對食物過敏小鼠盲腸微生物

8、區(qū)系的影響
　　 本試驗利用PCR/DGGE技術(shù)研究了OVA誘導(dǎo)過敏對小鼠盲腸食糜微生物區(qū)系的影響，以及大豆苷元和染料木素對致敏小鼠盲腸食糜微生物區(qū)系的影響。結(jié)果表明，OVA誘導(dǎo)過敏和大豆苷元或染料木素對小鼠盲腸食糜的DGGE條帶數(shù)和多樣性指數(shù)皆沒有顯著影響.DGGE圖譜顯示，OVA誘導(dǎo)導(dǎo)致一特導(dǎo)條帶消失，但口服大豆苷元或染料木素的致敏小鼠仍可觀察到該特征條帶存在；切膠測序后，基因序列比對結(jié)果顯示，該特征條帶所對應(yīng)的微生物與At

9、opostipes suicloacalis的相似性為96％.口服大豆苷元或染料木素小鼠導(dǎo)致某一特異條帶出現(xiàn)，切膠測序后，基因序列比對結(jié)果顯示，該特征條帶所對應(yīng)的微生物與Clostridium metallolevans strain ASI1相似性為99％.結(jié)果說明，OVA過敏誘導(dǎo)沒有導(dǎo)致Balb/c小鼠盲腸微生物區(qū)系優(yōu)勢條帶數(shù)減少或多樣性降低，但使個別細菌的優(yōu)勢種群地位消失，口服大豆苷元或染料木素可穩(wěn)定這些優(yōu)勢菌群，大豆苷元和染料木

10、素可使某些菌群得以富集.
　　 5.TLRs在產(chǎn)氣莢膜梭菌感染進程中的表達
　　 本試驗利用分子生物學(xué)方法研究肉雞在產(chǎn)氣英膜梭菌感染后TLR及其相關(guān)配體和細胞因子的表達.結(jié)果表明，產(chǎn)氣莢膜梭菌攻毒后，脾臟和回腸中TLR及其相關(guān)配體和細胞因子變化規(guī)律明顯不同：在脾臟中，TLRl.2、TLR2.1和TLR15顯著上調(diào)，且彼此高度相關(guān)（P<0.05），但其部分相關(guān)配體和細胞因子出現(xiàn)下調(diào)或有下調(diào)趨勢；在回腸中，TLRI.1、TL

11、R2.2和TLR21在攻毒后上調(diào)，且彼此高度相關(guān)（P<0.05），其相關(guān)分子MyD88、TRAF6、TRIF、IRF3、RIP-1和IL-8的表達都在攻毒后顯著上調(diào)（P<0.05）；回腸類TNF-α的表達也顯著上調(diào)（P<0.05），但與各TLRs無顯著相關(guān)性.此外，TLR4和TLR7在脾臟中的表達也有所上調(diào)，但在回腸中無顯著變化。結(jié)果說明，TLR2亞群在產(chǎn)氣莢膜梭菌感染中起重要作用，但其表達模式在回腸和脾臟中存在很大差異，脾臟的免疫應(yīng)答