1、第十次實(shí)驗(yàn) 抗生素抗菌譜及微生物的耐藥性的測(cè)定,實(shí)驗(yàn)(一) 抗生素抗菌譜的測(cè)定,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)抗生素抗菌譜的測(cè)定方法，了解常見(jiàn)抗生素的抗菌譜。,,抗生素——是一類由微生物或其它生物生命活動(dòng)中合成的次級(jí)代謝產(chǎn)物或其人工衍生物，在低濃度時(shí)就能抑制或干擾它種生物（包括病原菌、病毒、癌細(xì)胞等）的生命活動(dòng)，可作為優(yōu)良的化學(xué)治療劑。,各種抗生素有其不同的制菌范圍，即抗菌譜。如青霉素一般對(duì)G+細(xì)菌有抗性；鏈霉素以抗G-為主；慶大霉素、頭

2、孢霉素兼抗G+、G-細(xì)菌；氯霉素、四環(huán)素能同時(shí)抗G+、G-細(xì)菌及立克次氏體和衣原體，稱為廣譜抗生素。,實(shí)驗(yàn)原理,,抗菌譜,不同抗生素抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的機(jī)制不同，如青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，四環(huán)素抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。,實(shí)驗(yàn)材料菌種： 各種不同來(lái)源的細(xì)菌。培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基供試抗生素： 卡那霉素（母液濃度50mg/mL，溶于水) 設(shè)備與用具： 恒溫培養(yǎng)箱、接種環(huán)、培養(yǎng)皿。,實(shí)驗(yàn)步驟,

3、1 倒（牛肉膏蛋白胨＋卡那霉素(終濃度50μg/mL)）平板2 將平板(皿底）劃分為6等份，每一等份內(nèi)標(biāo)明一種細(xì)菌的名稱；3 用接種環(huán)分別接種不用來(lái)源的細(xì)菌至相應(yīng)的區(qū)域4 將劃好線的細(xì)菌平板，置37℃倒置培養(yǎng)24h-48h。5 記錄細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，根據(jù)細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，可初步確定卡那霉素的抗菌譜。,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果 記錄各種不同來(lái)源的細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)微生物耐藥性的測(cè)定方法，了解微生物對(duì)抗生素耐

4、藥性產(chǎn)生的原因及對(duì)策,實(shí)驗(yàn)(二) 微生物耐藥性的測(cè)定,耐藥性(antibiotic resistance)——即抗藥性,指微生物、寄生蟲(chóng)或腫瘤細(xì)胞對(duì)于化學(xué)治療藥物作用的耐受性。耐藥性一旦產(chǎn)生，藥物的化療作用就明顯下降。,實(shí)驗(yàn)原理,耐藥性產(chǎn)生的原因,1、產(chǎn)生一種使藥物失去活性的酶；2、把藥物作用的靶位加以修飾和改變；3、形成“救護(hù)”途徑4、使藥物不能透過(guò)細(xì)胞膜；5、通過(guò)主動(dòng)外排系統(tǒng)把進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出細(xì)胞外；,實(shí)驗(yàn)材料菌種：

5、金黃色葡萄球菌。培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基供試抗生素： 慶大霉素、卡那霉素、四環(huán)素、氨芐青霉素、壯觀霉素和鏈霉素、無(wú)菌水設(shè)備與用具： 恒溫培養(yǎng)箱、鑷子、圓濾紙片、培養(yǎng)皿。,濾紙片法測(cè)定微生物的耐藥性,所需濃度抗生素溶液配制A 氨芐青霉素（50μg/mL) ，B 卡那霉素（50μg/mL) ，C 四環(huán)素（50μg/mL) ， D 慶大霉素（50μg/mL) ，E 鏈霉素（50μg/mL) ，F(xiàn)

6、壯觀霉素(50μg/mL) ，,實(shí)驗(yàn)步驟,1 倒牛肉膏蛋白胨平板2 取0.2ml菌液加入平板中，涂布均勻。3 將平板(皿底）劃分為6等份，每一等份內(nèi)標(biāo)明一種抗生素的名稱；分別將浸有各種抗生素的小圓濾紙片貼在平板的每一等份中。4 將貼好濾紙片的含菌平板，置37℃倒置培養(yǎng)24-48h。5 測(cè)量并記錄抑菌圈的直徑，抑(殺)菌圈的大小，能夠反映抗生素抑(殺)菌能力的大??；根據(jù)其直徑的大小，可初步確定細(xì)菌對(duì)各種抗生素的耐藥性情況(或敏感性