1、分析方法驗證鹽酸氟西汀驗證實例,現(xiàn)代驗證系列,簡介,美國某公司生產(chǎn)10mg和20mg鹽酸氟西汀兩種相膠囊其重量與配方相同,僅鹽酸氟西汀與輔料比例不同所驗證方法是公司內(nèi)部對美國和歐盟市場產(chǎn)品產(chǎn)品放行和穩(wěn)定性研究中使用的含量和雜質(zhì)分析的方法該分析方法已經(jīng)建立,2,含量與雜質(zhì)的分析方法基本一致,驗證項目清單,精密度線性范圍準確性,低濃度鹽酸氟西汀驗證m-鹽酸氟西汀驗證選擇性耐用性,3,精密度,項目:系統(tǒng)重復性方法重復性

2、中間精密度,4,系統(tǒng)重復性,方法按照分析方法要求,配制鹽酸氟西汀標準溶液重復進樣5次計算峰面積平均值相對標準偏差,5,目的是檢查系統(tǒng)是否可靠,方法重復性,方法按照分析方法要求,分別配制20mg鹽酸氟西汀樣品溶液6個分別進樣計算含量相對標準偏差,6,目的是檢查分析方法本身是否可靠,中間精密度,方法由另外一個分析員在不同日期另外的儀器上按照分析方法要求分別配制20mg鹽酸氟西汀樣品溶液6個計算含量及相對標準

3、偏差,7,目的是檢查分析方法對不同人,日期,儀器是否可靠,線性,方法正常含量分析用標準溶液濃度的50%到200%范圍內(nèi)均勻選擇5個點配制相應濃度的鹽酸氟西汀含量標準溶液分別進樣計算線性回歸分析相關系數(shù)斜率Y軸截距,8,范圍,方法正常20mg樣品含量分析濃度50%到200%范圍內(nèi)均勻選5個點并配制鹽酸氟西汀樣品溶液分別進樣計算線性回歸分析相關系數(shù)斜率Y軸截距,9,準確性,項目:標準品準確性樣品準確性

4、,10,標準品準確性,方法按照分析方法要求配制鹽酸氟西汀標準溶液重復進樣5次計算準確性測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算,11,樣品準確性,方法按照產(chǎn)品的標示量在70%到180%正常標示量選均勻選擇4個點混合輔料與及鹽酸氟西汀每點3個樣品分別進樣計算回收率測定濃度值用峰面積按照回歸方程進行計算,12,低濃度鹽酸氟西汀驗證,項目:線性準確性系統(tǒng)重復性定量限度檢測限度,13,線性,方法按照分析方法

5、要求均勻選擇6個點配制標示量的0.02%到1.0%含量標準溶液分別進樣計算線性回歸分析相關系數(shù)斜率Y軸截距,14,準確性,方法配制雜質(zhì)濃度的標準溶液進樣6次計算按峰面積用回歸線性方程來計算測量濃度平均值相對標準偏差,15,系統(tǒng)重復性,方法配制工作濃度的0.02%和0.05%標準溶液分別進樣6次計算峰面積的平均值相對標準偏差,16,定量限度,用系統(tǒng)重復性實驗中的標準偏和線性回歸方程中的斜率差計算,17

6、,檢測限度,用系統(tǒng)重復性實驗中的標準偏和線性回歸方程中的斜率差計算,18,m-鹽酸氟西汀驗證,項目:線性檢測限度定量限度準確性精密度方法重復性中間精密度,19,m-鹽酸氟西汀簡介,m-鹽酸氟西汀是產(chǎn)品中的一個雜質(zhì)m-鹽酸氟西汀在0.05%－1.0%區(qū)間呈線性相對響應因子(對鹽酸氟西汀):F=132.73952/74859534=1.8,20,定量限度,根據(jù)鹽酸氟西汀定量限度?相對響應值計算鹽酸m-氟西汀定量限度,21

7、,檢測限度,根據(jù)鹽酸氟西汀檢測限度?相對響應值計算鹽酸m-氟西汀檢測限度,22,回收,方法:分別6個標空白中加0.05%的m-鹽酸氟西汀進樣計算:回收率實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算,23,準確性,方法:在已知m-鹽酸氟西汀含量的樣品中分別在0.4%,0.5%和0.6%3個水平加入m-鹽酸氟西汀標準品每組3個樣品中計算:回收率實際檢測值用峰面積按照回歸線性方程計算,24,重復性,項目:方法重復性中間精密度,

8、25,方法重復性,方法:按照要求配制溶液反復進樣6次計算:平均值標準偏差相對標準偏差,26,中間精密度,方法:另外一個分析員在不同日期另外的儀器上按照方法重復性方法配制溶液6次并分別進樣計算:含量相對標準偏差,27,選擇性,降解原樣酸降解堿降解氧化降解日光降解溶液加熱降解粉末加熱降解,系統(tǒng)適應性空白,28,簡介,降解產(chǎn)物的選擇性試驗是分析方法穩(wěn)定性指示性驗證的一個重要部分主要目的是通過試驗證

9、明各種降解的產(chǎn)物與所要分析的物質(zhì)可以完全分開本試驗中的主要設備是二極管矩陣檢測器并通過計算純度角,匹配角,純度閾值,匹配閾值,含量來證明峰的純度,29,原樣品,方法20mg膠囊按照規(guī)定的方法進樣分析標準品按照規(guī)定的方法進樣分析,30,酸降解,樣品稱量大約等量20mg的樣品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑并超聲處理10分鐘加1ml的濃鹽酸放置18小時用10N氫氧化鈉中和到pH5.5稀釋到刻度過濾,31,酸

10、降解,標準品稱量大約22mg的標準品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑,加2ml的鹽酸放置18小時用10N氫氧化鈉中和到pH5.5稀釋到刻度,32,堿降解,樣品稱量大約等量20mg的樣品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑,并超聲處理10分鐘加1ml的5N氫氧化鈉放置18小時用5N鹽酸中和到pH5.5稀釋到刻度過濾,33,堿降解,標準品稱量大約22mg的標準品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml

11、稀釋劑加2ml的5N氫氧化鈉放置18小時用5N鹽酸中和到pH5.5稀釋到刻度,34,氧化降解,樣品稱量大約等量20mg的樣品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑并超聲處理10分鐘加1ml的30%過氧化氫放置5小時稀釋到刻度過濾,35,氧化降解,標準品稱量大約22mg的標準品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑2ml的30%過氧化氫放置5小時稀釋到刻度,36,陽光降解,樣品稱量大約等量20mg

12、的樣品在500w/hr.cell下曝光1小時設定BST35?C,ACT45?C,37,陽光降解,標準品稱量大約等量20mg的樣品在500w/hr.cell下曝光1.5小時設定BST35?C,ACT42?C,38,溶液加熱降解,樣品稱量大約等量20mg的樣品轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中加入20ml稀釋劑并超聲處理10分鐘稀釋到刻度取4ml溶液并轉(zhuǎn)移到坩堝內(nèi)與105?C加熱2小時冷卻到室溫過濾,39,溶液加熱降解,標準

13、品4ml的工作標準液轉(zhuǎn)移到坩堝內(nèi)與105?C加熱2小時冷卻到室溫過濾,40,粉末加熱降解,樣品稱量大約等量20mg的樣品轉(zhuǎn)移到合適的試管中于100?C加熱4小時冷卻到室溫轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶加入20ml稀釋劑并超聲處理10分鐘稀釋到刻度過濾,41,粉末加熱降解,標準品稱量大約等量45mg的標準品轉(zhuǎn)移到合適的試管中于100?C加熱4小時冷卻到室溫轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶稀釋到刻度過濾,系統(tǒng)適應性,系統(tǒng)

14、適應性按照規(guī)定方法進行氟西汀與m-氟西汀間分離度應不小于2.0氟西汀峰拖尾因子應不大于2.0氟西汀的典型保留時間大約在9.5到10.0分之間,43,空白,分析兩個批號的空白與氟西汀,并分析混合樣品沒發(fā)現(xiàn)干擾峰,44,標準與樣品溶液的穩(wěn)定性,項目:標準溶液樣品溶液,45,標準溶液穩(wěn)定性,方法配制標準溶液冷藏于4?C－8?C放置30天以上與兩個新配制的標準溶液一道測試,46,樣品溶液穩(wěn)定性,方法配制樣品溶液冷藏放置48