1、第七章 寄生蟲病診斷,第一節(jié)病原學(xué)診斷方法,一、糞便蟲卵檢查法,1.直接涂片法 direct smear method 2.漂浮集卵法 flotation method 3.沉淀集卵法 sedimentation method4.麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法 MacMaster method,5.毛蚴孵化法 是診斷日本血吸蟲及 東畢吸蟲的方法之一,取被檢糞便30~100g(牛 100g)經(jīng)沉淀集卵法處理

2、， 將沉淀倒入500ml三角燒 瓶?jī)?nèi)，加溫清水(自來(lái)水 需脫氯處理)至瓶口，置 22~26℃孵化，第1、3、 5h，用肉眼或放大鏡觀 察并記錄一次。,如見水面下有白色點(diǎn)狀物做直線來(lái)往運(yùn)動(dòng)，即是毛蚴，但需與水中一些原蟲如草履蟲、輪蟲等相區(qū)別。必要時(shí)吸出在顯微鏡下觀察。氣溫高時(shí)，毛蚴孵出迅速，因此，在沉淀處理時(shí)應(yīng)嚴(yán)格掌握換水時(shí)間，以免換水時(shí)傾去毛蚴造成假陰性結(jié)果。,也可用1.0%~1.2%食鹽

3、水沖洗糞便,以防止毛蚴過(guò)早孵出，但孵化時(shí)應(yīng)用清水,6. 糞便培養(yǎng)與幼蟲分離法圓線蟲目所屬線蟲種類很 多，其蟲卵在形態(tài)上非常 相似，很難區(qū)別。有時(shí)為 了區(qū)別這些線蟲的種類， 常將含有蟲卵的糞便加以 培養(yǎng)，待其中蟲卵發(fā)育成 為幼蟲時(shí)，再檢查幼蟲， 根據(jù)幼蟲形態(tài)上的差異， 加以鑒別,有些寄生蟲（如網(wǎng)尾科線 蟲），其蟲卵在新排出的 糞便中已變?yōu)橛紫x；類圓 屬線蟲的卵隨糞便排出后

4、， 在外界溫度較高時(shí)，經(jīng)5- 12小時(shí)后，即孵出幼蟲。 為了提高檢出率，常將幼 蟲從糞便中分離出來(lái)進(jìn)行 檢查,常用的方法為漏斗幼蟲 分離法 亦稱貝爾曼法 (Baermann's technique),最常用的方法是在培養(yǎng) 皿底部加草紙或?yàn)V紙一 張，而后將欲培養(yǎng)的糞 便加水調(diào)成硬糊狀，塑 成半球形，放于皿內(nèi)的 紙上，并使半球形糞球 的頂部略高出平皿邊

5、沿， 使加蓋時(shí)與皿蓋相接觸。,將此皿置25℃溫箱中，注意保持皿內(nèi)濕度（應(yīng)使底部的墊紙保持潮濕狀態(tài)）。經(jīng)7天后，多數(shù)蟲卵即可發(fā)育成第三期幼蟲，并集中于皿蓋上的水滴中。將幼蟲吸出置載玻片上，放顯微鏡下檢查,7. 測(cè)微技術(shù)各種蟲卵和幼蟲，常有 恒定的大小，測(cè)量蟲卵 或幼蟲的大小，可作為 確定某一蟲卵或幼蟲的 依據(jù)。蟲卵和幼蟲的測(cè) 量需用測(cè)微器,二、體表蟲體檢查法,寄生于動(dòng)物體表的寄生蟲

6、主要有蜱、螨、虱等。對(duì) 于它們的檢查，可采用肉 眼觀察和顯微鏡觀察相結(jié) 合的方法,蜱寄生于動(dòng)物體表，個(gè)體 較大，通過(guò)肉眼觀察即可 發(fā)現(xiàn)螨和虱有些個(gè)體較小，常 需刮取皮屑，于微鏡下尋 找蟲體或卵,三、生殖道蟲體檢查,寄生于生殖道的蟲體主要 有牛胎兒三毛滴蟲和馬媾 疫錐蟲,牛胎兒毛滴蟲存在于病 母牛的陰道與子宮的分 泌物、流產(chǎn)胎兒的羊水、 羊膜或其第四胃內(nèi)容物

7、中，也存在于公牛的包 皮鞘內(nèi)，應(yīng)采取以上各 處的病料尋找蟲體,由于蟲體的檢定，常以見 到運(yùn)動(dòng)活潑的蟲體為準(zhǔn)， 故在采集病料時(shí)必需盡可 能地避免污染，以免其它 鞭毛蟲混入病料造成誤診。 采集用的器皿和沖洗液等 應(yīng)加熱使接近體溫，否則 蟲體驟然遇冷會(huì)失去活動(dòng) 力或死亡。,沖洗液應(yīng)采用以玻璃蒸餾裝置制備的蒸餾水配制生理鹽水，以保證沖洗液中不含金屬離子，減少金屬離子對(duì)蟲體的影響。病料采

8、集后應(yīng)盡快地進(jìn)行檢查,由母畜采集病料，是取陰 道分泌的透明粘液，以直 接自陰道內(nèi)采取為良好， 建議用一根長(zhǎng)45厘米，直 徑1.0厘米的玻璃管，在 距一端的12厘米處，彎成 150°角，而后消毒備用。,使用時(shí)將管的“短臂”插入受檢畜的陰道，另端接一橡皮管并抽吸，少量陰道粘液即可吸入管內(nèi)。取出玻管，兩端塞以棉球，帶回實(shí)驗(yàn)室檢查,收集公牛包皮沖洗液，應(yīng) 先準(zhǔn)備100—150毫升加溫 到

9、30—35℃的生理鹽水， 用針筒注入包皮腔。用手 指將包皮口捏緊，用另一 手按摩包皮后部，而后放 松手指，將液體收集于廣 口瓶中待查,流產(chǎn)胎兒，可取其第四 胃內(nèi)容物，胸水或腹水 檢查,檢查時(shí)應(yīng)將收集到的病料， 立即放于載玻片上，并防 止材料干燥。對(duì)濃稠的陰 道粘液，檢查前最好以生 理鹽水稀釋2-3倍，羊水或 包皮洗滌物最好先以每分 鐘2000轉(zhuǎn)的速度離心沉淀

10、 5分鐘，而后以沉淀物制片 檢查。,未染色的標(biāo)本主要檢查活動(dòng)的蟲體，在顯微鏡下可見其長(zhǎng)度略大于一般的白細(xì)胞，能清楚地見到波動(dòng)膜，有時(shí)尚可見到鞭毛，在蟲體內(nèi)部可見含有一個(gè)圓形或橢圓形的有強(qiáng)折光性的核。,波動(dòng)膜的發(fā)現(xiàn)，常作為本蟲與其它一些非致病性鞭毛蟲和纖毛蟲在形態(tài)上相區(qū)別的依據(jù)。也可將標(biāo)本固定，用姬氏染液或蘇木素染色后檢查,馬媾疫錐蟲在末梢血液中 很少出現(xiàn)，因此血液學(xué)檢 查在馬媾疫診斷上的用處 不大。檢查材料主

11、要應(yīng)采 取浮腫部皮膚或丘疹的抽 出液，尿道及陰道的粘膜 刮取物，特別在粘膜刮取 物中最易發(fā)現(xiàn)蟲體,采取病料時(shí)，浮腫液和皮 膚丘疹液用消毒的注射器 抽取，為了防止吸入血液 發(fā)生凝固，可于注射器內(nèi) 先吸入適量的 2% 檸檬酸 鈉生理鹽水。,馬陰道粘膜刮取物的采取，先用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)張陰道，再用長(zhǎng)柄銳匙在其粘膜有炎癥的部位刮取，刮時(shí)應(yīng)稍用力，使刮取物微帶血液，則其中容易檢到錐蟲。,采取公

12、馬尿道刮取物時(shí)，應(yīng)先將馬保定，左手伸入包皮內(nèi)，以食指插入龜頭窩中，徐徐用力以牽出陰莖，用消毒的長(zhǎng)柄銳匙插入尿道內(nèi)，刮取病料,以上所采的病料，均可加 適當(dāng)量的生理鹽水，置載 玻片上，覆以蓋玻片，制 成壓滴標(biāo)本檢查；也可制 成抹片，用姬氏液染色后 檢查,也可用滅菌紗布，以生理 鹽水浸濕，用敷料鉗夾持， 插入公馬尿道或母馬陰道， 擦洗后，取出紗布，洗入 無(wú)菌生理鹽水中，將鹽水

13、離心沉淀，取沉淀物檢查， 方法同上,四、血液和組織內(nèi)蟲體 檢查法,1. 鮮血壓滴標(biāo)本檢查2. 涂片染色標(biāo)本檢查 3. 蟲體濃集法,涂片法雖然可以查到血液 中的原蟲，但血液中的蟲 體較少時(shí)，則不易查出蟲 體。為此，常先進(jìn)行集蟲， 再制片檢查。其操作過(guò)程 是采病畜抗凝血6-7毫升， 以每分鐘500轉(zhuǎn)的速度，離 心5分鐘，使其中大部分紅 細(xì)胞沉降；,而后將含有少量紅細(xì)胞

14、，白細(xì)胞和蟲體的上層血漿移入另一離心管中，補(bǔ)加一些生理鹽水，以每分鐘2500轉(zhuǎn)的速度離心10分鐘。取沉淀物制成抹片，按上述染色法染色檢查。此法適用于伊氏錐蟲病和梨形蟲病。,其原理是錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞較正常紅細(xì)胞的比重為輕，所以在第一次沉淀時(shí)，正常紅細(xì)胞下降，而錐蟲和感染有梨形蟲的紅細(xì)胞尚懸浮在血漿中。第二次離心沉淀時(shí)，則將其濃集于管底。,對(duì)于血液中的微絲蚴，也可用蟲體濃集法。方法是采血于離心管中。加入5%醋酸溶液以溶

15、血。待溶血完成后，離心并吸取沉淀檢查,4. 組織內(nèi)蟲體檢查法有些原蟲可以在動(dòng)物身體的 不同組織內(nèi)寄生。一般在死 后剖檢時(shí)，取一小塊組織， 以其切面在載玻片上做成抹 片、觸片，或?qū)⑿K組織固 定后制成組織切片，染色檢 查。抹片或觸片可用瑞氏染 色法或姬氏染液染色,泰勒蟲的病畜，常呈現(xiàn)局 部體表淋巴結(jié)腫大，取淋 巴結(jié)穿刺物，進(jìn)行顯微鏡 檢查以尋找病原體，對(duì)本 病的早期診斷很

16、有幫助。 其方法是，首先將病畜保 定，用右手將腫大的淋巴 結(jié)稍向上方推移，并用左 手固定淋巴結(jié)；,局部剪毛，消毒，以10毫升注射器和較粗的針頭刺入淋巴結(jié)，抽取淋巴組織；拔出針頭，將針頭內(nèi)容物推擠到載玻片上，涂成抹片，固定，染色，鏡檢，可以找到柯赫氏藍(lán)體,家畜患弓漿蟲病時(shí)，除死 后可在一些組織中找到包 囊和速殖子外，生前診斷 可取腹水，檢查其中滋養(yǎng) 體的存在。收集腹水，豬 只可

17、采取側(cè)臥保定，穿刺 部在白線下側(cè)臍的后方 （公畜）或前方（母畜） 1-2厘米處。,穿刺時(shí)先局部消毒，將皮膚推向一側(cè)，針頭以略傾斜的方向向下刺入，深度約2-4厘米，針頭刺入腹腔后會(huì)感到阻力驟減，而后有腹水流出。取得的腹水可在載玻片上抹片，以瑞氏液或姬氏液染色后檢查,旋毛蟲的幼蟲寄生于橫紋 肌中肌肉中旋毛蟲的檢查，是 肉品衛(wèi)生檢驗(yàn)的重要項(xiàng)目， 世界各國(guó)使用的方法大同 小異。傳統(tǒng)的方法為鏡檢 法

18、，但目前歐、美等國(guó)多 用消化法,鏡檢法為取隔肌肉樣0.5~ 1g剪成3×10mm的小塊， 用厚玻片壓緊，放顯微 鏡下檢查或投放到屏幕 上觀察,消化法為取100g肉樣，攪碎 或剪碎，放入3L的燒瓶?jī)?nèi)。 加入10g胃蛋白酶，溶于2L 自來(lái)水。加入16ml鹽酸 （25%），放入一磁力攪拌 棒。置于可加熱的磁力攪拌 器上，設(shè)溫于44~46℃。,30min后, 將消化液用1

19、80μm的濾篩濾入一2L的分離漏斗, 靜置30min, 放出40ml液體于一50ml的量筒內(nèi), 靜置10min, 吸去30ml上清夜。,加入30ml水，搖勻。10min后，再吸去30ml上清液。剩下的液體到入一帶有格線的平皿內(nèi)，用20-50X顯微鏡觀察,五、動(dòng)物接種法,伊氏錐蟲 試驗(yàn)動(dòng)物可用小鼠、大鼠、豚鼠、兔或犬。其中尤以小鼠最適用。接種材料用可疑病畜的抗凝血液，血液采取后應(yīng)在2-4小時(shí)內(nèi)接種完畢。接種量0.5-1.

20、0毫升，可接種于腹腔或皮下。,接種后的動(dòng)物應(yīng)隔離并經(jīng)常檢查。當(dāng)病料中含蟲較多時(shí)，小鼠在接種后1-3日即可在其外周血液中查到錐蟲，當(dāng)病料內(nèi)含蟲量少時(shí)，發(fā)病時(shí)間可能延長(zhǎng)，,因此接種后至少觀察一個(gè)月，也可于接種的第3天采接種小鼠的血液0.5~1.0毫升，接種于另一只小鼠，如此盲傳3代，即可在接種小鼠外周血內(nèi)發(fā)現(xiàn)蟲體,2.馬媾疫 馬媾疫錐蟲不能接種于多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，但可將病畜的陰道或尿道刮取物與無(wú)菌生理鹽水混合，接種于公家兔的睪丸實(shí)

21、質(zhì)中，每個(gè)睪丸的接種量為0.2毫升。,如有媾疫錐蟲存在，經(jīng)1-2周后，即可見家兔的陰囊、陰莖、睪丸以及耳、唇周圍的皮膚發(fā)生水腫，并可在水腫液內(nèi)檢出蟲體,3.胎兒毛滴蟲 取病牛陰道分泌物或包皮沖洗液為病料，接種于妊娠豚鼠的腹腔內(nèi)，在接種后1-20天可以使妊娠豚鼠發(fā)生流產(chǎn)，在其流產(chǎn)胎兒的消化道和胎盤里可查出大量的毛滴蟲,4.弓形蟲 弓形蟲是多宿主病原原蟲，多種家畜和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均具有易感性，但小鼠對(duì)之特別敏感，常常僅數(shù)十

22、個(gè)蟲體即可使小鼠感染發(fā)病。,一般取急性死亡的可疑動(dòng)物的肺、淋巴結(jié)、脾、肝或腦組織，以1∶5的比例加入生理鹽水，制成乳劑，并加少量青霉素和鏈霉素以控制雜菌感染。,吸取乳劑0.2毫升接種于小鼠腹腔，一般急性者在4-5天后發(fā)病，病鼠被毛粗亂，食欲消失，腹部膨大，有大量腹水，病程4-5天，最后死亡。抽取病鼠或病死鼠的腹水作涂片，染色檢查，可見大量游離的滋養(yǎng)體,六、動(dòng)物剖檢法,1.全身剖檢法在動(dòng)物死亡（或捕殺）后， 首先制作

23、血片，染色檢查， 觀察血液中有無(wú)寄生蟲， 而后仔細(xì)檢查體表，觀察 有無(wú)體表寄生蟲,而后剝皮，觀察皮下組織 中有無(wú)蟲體寄生,將各內(nèi)部臟器依次取出， 先收集胸水，腹水，沉 淀后觀察其中有無(wú)寄生 蟲。而后取出全部消化 器官及其所附的肝、胰 等腺體。取出呼吸系統(tǒng)、 泌尿系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)、 心臟和大的動(dòng)脈和靜脈 血管，分別進(jìn)行檢查,消化系統(tǒng) 先將附著其上的肝、胰取下，

24、再將食道，胃（反芻獸應(yīng)將四個(gè)胃分開）、小腸、大腸、盲腸分別結(jié)扎后分離,呼吸器官 用剪刀將鼻、喉、氣管、支氣管切開，尋找蟲體。用小刀刮氣管粘膜，刮下物在解剖鏡下檢查。肺組織按肝臟處理方法,泌尿器官 切開腎，先對(duì)腎盂作肉眼檢查，再刮取腎盂粘膜檢查。最后將腎實(shí)質(zhì)切成薄片，壓于兩玻片間，在放大鏡或解剖鏡下檢查。剪開輸尿管，膀胱和尿道，檢查其粘膜，并注意粘膜下有無(wú)包囊。收集尿液，用反復(fù)沉淀法處理,生殖器官

25、 切開并刮下粘膜，壓片檢查。懷疑為馬媾疫和牛胎兒毛滴蟲病時(shí)，應(yīng)涂片染色后油鏡檢查,腦 先肉眼檢查有無(wú)多頭蚴，再切成薄片，壓片檢查 眼 結(jié)膜和結(jié)膜腔以括搔法處理檢查。剖開眼球，將前房水收集于皿中，在放大鏡下檢查,心和主要血管 剖開將內(nèi)容物洗于生理鹽水中，反復(fù)用沉淀法檢查（對(duì)血管內(nèi)分體吸蟲的收集見后） 膈腳 特別是豬，應(yīng)用鏡檢法和消化法進(jìn)行檢查,2.個(gè)別器官和個(gè)別寄生蟲 剖檢法,有時(shí)為了特定的目的，

26、僅對(duì) 某一器官或某一器官中的某 種寄生蟲進(jìn)行檢查，如調(diào)查 某一地某一器官中寄生蟲寄 生的情況，或調(diào)查某一地區(qū) 某種寄生蟲的流行情況，或 考核某一藥品對(duì)某種寄生蟲 的驅(qū)蟲效果。,其剖檢方法同全身剖檢法。但日本分體吸蟲的剖檢需采用專門的方法，介紹如下,動(dòng)物經(jīng)宰殺停止掙扎后，為防止發(fā)生血液凝固，影響蟲體收集，應(yīng)有四個(gè)人分別從四條腿開始從速進(jìn)和剝皮。事畢，將牛頭彎轉(zhuǎn)至牛體左側(cè)，使牛仰臥呈偏左

27、傾斜姿勢(shì)，剖開胸腔及腹腔，除去胸骨。,首先分開左右肺找出暗紅色的后腔靜脈進(jìn)行結(jié)扎。接著，在胸腔緊靠脊柱的部位找到白色的胸主動(dòng)脈，術(shù)者左手將其托起，右手用尖頭剪刀取與血管平行的方向剪一開口，,然后將帶有橡皮管的玻璃管以離心方向插入，并以棉線結(jié)扎固定。橡皮管的一端與壓縮式噴霧器相接，以備進(jìn)水。,第三，從腎臟后方緊貼脊柱處，同時(shí)結(jié)扎并列的腹主動(dòng)脈與后腔靜脈，以避免沖洗液流向后軀其它部分。,第四，在膽囊附近，肝門淋巴結(jié)背