1、1,第七章 細菌感染的診斷與防治原則,Examination and strategy of prevention and therapy for bacterial infection,2,細菌感染的實驗室診斷主要包括：,細菌學診斷 ----以檢測致病菌及其抗原或代謝產物為目的血清學診斷 ----以檢測患者血清中特異性抗體為目的基因診斷 ----以檢測致病菌特異性DNA片段為目的,3

2、,第一節(jié) 細菌學診斷,,4,一、標本的采集原則：,,無菌采集 嚴格無菌操作，避免標本被污染。標本收集于無菌容器中，容器須先經高壓滅菌、煮沸、干熱等物理方法滅菌，或用一次性無菌容器，而不能用消毒劑處理。,5,早期采集,采集時間最好是病程早期、急性期或癥狀典型時，且必須在抗菌藥物使用前，否則這份標本在分離培養(yǎng)時要加入藥物拮抗劑。,6,取樣部位,不同疾病、不同時期取不同部位標本 如流腦病人取CSF、血液或出血瘀斑；傷寒病人在病

3、程1～2周內取血液，2～3周時取糞便。盡可能取病變明顯部位的材料 取局部病變標本，不可使用消毒劑，必要時以無菌生理鹽水沖洗，拭干后取材。,7,糞標本：自然排便采集糞便標本時，取有膿血、粘液的糞便一小匙。液體糞便則取絮狀物，一般取1～3ml，直接裝入糞便容器或保存液或運送培養(yǎng)基中送檢。,8,痰標本：采集標本前應用清水、冷開水漱口有假牙者應取下假牙。首先輕咳，咳出咽喉部的分泌物，棄去，再用力咳嗽，咳出肺部的痰液直接吐入無菌的容器中。

4、若懷疑結核感染找抗酸桿菌，應收集24小時的痰液于清潔玻璃容器內。若懷疑放線菌感染，應讓病人留取含有顆粒的痰液，實驗室查到硫磺顆粒且弱抗酸，可以考慮放線菌感染。,采集雙份血清,采集急性期及恢復期血清恢復期血清效價比急性期效價升高4倍或以上具有診斷意義。,9,10,,一般標本采集后最好在2h內送檢，大多細菌可4℃冷藏運送、特殊（如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌）需保溫立即送檢。糞便標本中雜菌多，常置于甘油緩沖鹽水保存液中。,盡快送檢、冷藏運送

5、,11,注意安全,烈性傳染病或病因不明患者臨床標本的采集時應做好防護工作。,12,1、直接涂片染色鏡檢 形態(tài)和染色性上有特征的致病菌，直接涂片鏡檢后有助于初步診斷。如：痰中查抗酸性桿菌，膿液中找G+葡萄串樣球菌等。,二、細菌學診斷方法,13,葡 萄 球 菌,霍 亂 弧 菌,14,結核分枝桿菌,A.結核分枝桿菌培養(yǎng)的鏡下形態(tài)(抗酸染色)B.結核分枝桿菌痰標本直接涂片(抗酸染色),15,2、分離培養(yǎng)（isolation and

6、 cultivation）： 所有標本原則上均應作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進一步鑒定，根據不同要求選用不同培養(yǎng)基。 分離培養(yǎng)比直接涂片鏡檢陽性率高，但需時較久；大多細菌16～24h，結核桿菌需4～8w。 分離培養(yǎng)是微生物學診斷的金標準。,16,分離培養(yǎng)　isolation and cultivation,分離培養(yǎng)是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術。（圖為普通孵箱）,17,厭

7、氧箱 厭氧袋,18,各種細菌所具有的酶不完全相同，對營養(yǎng)物質的分解能力亦不一致，因而其代謝產物有別，藉此可對不同致病菌進行鑒別（如腸道桿菌）。,3、生化試驗,糖發(fā)酵試驗,19,4、血清學試驗：,含特異抗體的免疫血清＋未知純種細菌進行血清學實驗，可確定致病菌的種和型。常見有玻片凝集試驗。,玻片凝集試驗,20,5、動物試驗：,主要用于分離、鑒定致病菌，測定菌株產毒性等。

8、 常用動物：小鼠、豚鼠、家兔 接種途徑：皮內、皮下、腹腔、肌肉、靜脈、腦內等。,21,6、藥物敏感試驗,測定標本中致病菌對藥物的敏感程度。對指導臨床用藥及控制感染有重要意義。常用紙碟法和試管稀釋法。,22,第二節(jié) 血清學診斷,采用已知的細菌或其特異性抗原，檢測患者血清或其他體液中有無相應特異性抗體及其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。,23,在血清學診斷中，最好采取患者急性期和恢復期雙份血清標本。 結果：

9、以抗體效價明顯高于正常人水平或患者恢復期抗體效價比急性期升高≥4倍方有意義。常用有凝集實驗、沉淀實驗、補體結合實驗、中和試驗、ELISA等。優(yōu)點：快速、靈敏且不受抗生素等藥物影響。,24,肥達試驗,玻片凝集實驗,25,第三節(jié) 分子生物學診斷,PCR技術 核酸雜交技術 DNA芯片技術,26,細菌學診斷基本方法,27,,,第四節(jié) 細菌感染的特異性防治,,28,特異性免疫產生的方式,人工免疫 人工主動免疫 疫苗、類毒素

10、 人工被動免疫 抗毒素、丙球自然免疫 自然被動免疫 胎盤、初乳 自然主動免疫 患病、隱性感染人工免疫：采用人工方法將疫苗、類毒素等或含有某種特異性抗體、細胞免疫制劑等接種于人體，以增強宿主體的抗病能力。,29,一、人工主動免疫,人為地將疫苗（vaccine）或類毒素接種于人體，使機體主動產生特異性免疫力的一種防治微生物感染的措施。,30,常用制劑,疫苗 ----滅活疫

11、苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、 核酸疫苗、重組活載體疫苗、轉基因植物疫苗和治療性疫苗。類毒素,31,1、滅活疫苗：,選用免疫原性強的細菌經人工大量培養(yǎng)后，用理化方法殺死而成。如傷寒、百日咳、霍亂等滅活疫苗。 優(yōu)點：易于制備和保存。 缺點：接種劑量大；維持時間短；接種次數多；注射的局部和全身性副反應較大；不產生細胞免疫應答。,32,,2、減毒活疫苗：,用減毒或無毒力的活病原體制成；如BCG 優(yōu)點：只需接種一次、接種劑量較小、 副反應

12、輕微或無、免疫效果好且持久、能同時產生細胞免疫和體液免疫；以自然途徑接種，有SIgA抗體的局部粘膜免疫形成。缺點：不易保存（冷藏且保存期短）、回復毒力的危險性,33,,,,34,3.亞單位疫苗：,,用化學方法裂解和提取或通過基因工程產生的細菌保護性抗原組分制成的疫苗。如:腦膜炎球菌的莢膜多糖，乙肝疫苗等。,35,4、核酸疫苗／DNA疫苗／基因疫苗,將能編碼誘發(fā)保護性免疫應答的病原體基因片段和能在真核細胞表達的質粒重組，直接注入宿主體

13、內使其表達目的免疫原，進而誘導出保護性抗體和細胞免疫的新型疫苗，如乙肝疫苗。 核酸疫苗的出現與發(fā)展是疫苗發(fā)展史上的第三次革命。,,36,,重組活載體疫苗轉基因植物疫苗治療性疫苗等,37,類毒素： 外毒素經0.3～0.4%甲醛作用3～4周后，毒性消失仍保持免疫原性的制品。如白百破三聯疫苗（DPT）是將白喉類毒素、百日咳死菌苗、破傷風類毒素混合而成。,38,,二、

14、人工被動免疫,給機體注射含特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白抗體，或細胞因子等制劑，使機體即刻獲得特異性免疫力的過程，以治療或緊急預防感染。,39,1、抗毒素：一般用細菌類毒素或外毒素多次免疫馬后采血，從血清中提取免疫球蛋白精制而成?？苟舅啬苤泻拖鄳耐舛舅兀钄嗥涠拘宰饔?。例如用于白喉、破傷風等疾病。 注射前需做皮膚試驗。 應早期、足量注射。,常用制劑,40,2、免疫球蛋白 ----丙種球蛋白、胎盤球蛋白

15、 （麻疹、甲肝、乙肝、脊髓灰質炎等）3、抗菌免疫血清,41,區(qū)別要點 人工主動免疫 人工被動免疫免疫物質 抗原 抗體或細胞因子免疫出現時間 慢，2～4周 快，立即免疫維持時間 長，數月～數年 短，2～3周主要用途