1、目錄,Part 1 肝病PCR檢測(cè)國(guó)內(nèi)外需求及現(xiàn)狀Part 2 肝病PCR檢測(cè)最新解決方案Part 3 肝病PCR檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì),目錄,Part 1 肝病PCR檢測(cè)國(guó)內(nèi)外需求及現(xiàn)狀Part 2 肝病PCR檢測(cè)最新解決方案Part 3 肝病PCR檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì),國(guó)際需求,2008年美國(guó)肝病協(xié)會(huì)CHB防治指南：持久消除HBV是乙肝的治療終點(diǎn)，HBV DNA病毒載量盡可能小于或等于10 IU/ ml。,國(guó)際需求,歐洲肝病研

2、究學(xué)會(huì)EASL2010年指南指出：將HBV DNA病毒載量盡可能控制在10-15 IU/ ml，能有效防止疾病的復(fù)發(fā)。歐洲肝病研究學(xué)會(huì)EASL2011指南指出：丙肝患者治療的目標(biāo)需HCV RNA病毒載量低于50 IU/ ml。,（一） 核苷(酸)類似物治療慢性乙肝路線圖,治療第12周評(píng)估原發(fā)性治療失敗HBV-DNA水平較基線水平下降幅度<1log/ml,60IU/ml如何檢測(cè)？,國(guó)際治療路線,* 由美國(guó)坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Ke

3、effe教授（專家組）提供,國(guó)內(nèi)行業(yè)指導(dǎo)原則,國(guó)家SFDA技術(shù)審評(píng)中心“863”課題《 HBV DNA定量試劑技術(shù)審評(píng)指導(dǎo)原則》中指出： HBV DNA建議最低檢測(cè)限應(yīng)≤30 IU/mL。 DNA提取純化方法不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。,國(guó)內(nèi)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),內(nèi)標(biāo)全程參與！核酸上樣量≥20 ul！,國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀,陳舊的技術(shù),繁瑣的過(guò)程,國(guó)內(nèi)現(xiàn)狀,國(guó)內(nèi)HBV DNA檢測(cè)方法多為煮沸法，試劑靈敏度均為500IU/ml或1000IU/ml。

4、國(guó)內(nèi)大部分HCV RNA檢測(cè)方法多為柱提法，試劑靈敏度≥1000IU/ml。,令人揪心的性能,專家呼吁,五種乙型肝炎病毒核酸熒光定量檢測(cè)試劑盒的比較,中華傳染病雜志，2009年 第3期——吳星,黃維金, 周誠(chéng) ,莊輝 等(中國(guó)藥品生物制品檢定所,北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部)國(guó)家“十一五”科技重大專項(xiàng) “乙型和丙型病毒性肝炎診斷及臨床監(jiān)測(cè)的研究” ——魯鳳民教授 北京大學(xué)肝炎試劑研究中心,專家呼吁：高精度，超敏感的核酸診斷試劑的開發(fā)是目前肝炎診療

5、中的關(guān)鍵步驟！,何去何從,面對(duì)當(dāng)前肝病毒核酸檢測(cè)技術(shù)的現(xiàn)狀，我們真沒(méi)有辦法了嗎？,解決方案,Part 1 肝病PCR檢測(cè)國(guó)內(nèi)外需求及現(xiàn)狀Part 2 肝病PCR檢測(cè)最新解決方案Part 3 肝病PCR檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì),臨床核酸提取技術(shù)的發(fā)展：,煮沸法,核酸檢測(cè)發(fā)展要求,核酸檢測(cè)發(fā)展要求,高精度 高品質(zhì) 高科技,磁珠法技術(shù),磁珠（電子顯微鏡）,磁珠分離器,磁珠法,----核酸診斷領(lǐng)域新方向。,技術(shù)原理,----通過(guò)超順磁性顆粒

6、富集核酸，實(shí)現(xiàn)樣品高純度、高靈敏度的檢測(cè)。,原理,技術(shù)性能,磁珠法提取核酸效率高，純度高，特異性好。采用最新一代的磁珠提取核酸技術(shù)，無(wú)需加熱、無(wú)需高速離心、靈敏度極高，能夠很好的滿足臨床診療的需求?？垢蓴_能力強(qiáng)，能勝任高血脂、強(qiáng)溶血以及藥物治療標(biāo)本的檢測(cè)，是臨床疾病檢測(cè)的有力手段。極易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。,靈敏度可達(dá)10IU/ml，是國(guó)產(chǎn)主流試劑的50-100倍； 準(zhǔn)確定量線性范圍為20IU/ml～2.0×109IU/ml

7、 可檢測(cè)HBV A、B、C、D、E、F、G、H共8個(gè)基因型。 設(shè)置了監(jiān)控內(nèi)標(biāo)IC,有效避免假陰性。 設(shè)置內(nèi)參比熒光ROX，定量更準(zhǔn)確。,以湖南圣湘乙肝磁珠法為例,臨床驗(yàn)證和對(duì)比,臨床驗(yàn)證和對(duì)比,以湖南圣湘乙肝磁珠法為例,* 9例定值在12 ~50 IU/ml之間,,圣湘磁珠法技術(shù)在靈敏度方面存在明顯優(yōu)勢(shì)，與進(jìn)口試劑具有很好的一致性，能夠很好的勝任臨床藥物療效的觀察和治療終點(diǎn)的確定。,Sansure-HBV ：圣湘HBV磁珠法

8、Roche-HBV ：羅氏 AmpliPrep-Cobas TaqMan HBV TestX-HBV：國(guó)內(nèi)一家上市公司的HBV產(chǎn)品（濃縮煮沸法）,發(fā)展趨勢(shì),Part 1 肝病PCR檢測(cè)國(guó)內(nèi)外需求及現(xiàn)狀Part 2 肝病PCR檢測(cè)最新解決方案Part 3 肝病PCR檢測(cè)的發(fā)展趨勢(shì),發(fā)展趨勢(shì),（25×33+288÷3）×15=？,簡(jiǎn)單化的要求,發(fā)展趨勢(shì),一步法技術(shù)：最簡(jiǎn)便的PCR技術(shù),一步操作即可實(shí)

9、現(xiàn)核酸提取。,發(fā)展趨勢(shì),一步法技術(shù)優(yōu)勢(shì)：,快速，處理96個(gè)樣本僅需 30min。成本低，僅需一套移液器即可實(shí)現(xiàn)病毒檢測(cè)。操作步驟少，減少誤差發(fā)生率，提高準(zhǔn)確性。極易掌握，對(duì)操作人員要求低，方便科室的人員安排。,發(fā)展趨勢(shì),準(zhǔn)確化的要求,----內(nèi)標(biāo)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，假陰性的克星。,內(nèi)標(biāo)的作用,內(nèi)標(biāo)參與核酸提取與擴(kuò)增，通過(guò)檢測(cè)內(nèi)標(biāo)是否正常來(lái)監(jiān)測(cè)核酸提取和核酸擴(kuò)增的有效性，試驗(yàn)結(jié)果是否有效，避免PCR假陰性。,FAM:525nm,HEX:555