1、,常見性病實驗室檢測方法的原理、方法和臨床意義,,病原體淋球菌梅毒螺旋體生殖器皰疹病毒生殖道沙眼衣原體乳頭瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血桿菌衣原體念珠菌滴蟲疥蟲陰虱肝炎病毒－－－,病 種淋病梅毒:生殖器皰疹:生殖道沙眼衣原體感染:尖銳濕疣:HIV感染/艾滋病:軟下疳:性病性淋巴肉芽腫:念珠菌性陰道炎:滴蟲性陰道病:疥瘡:陰虱病:肝炎（乙、丙）：－－－,性傳播疾病(STD)/性傳播感染

2、(STI),,梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS,梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫,50-60年代經(jīng)典性病,80-90年代監(jiān)測性病,,,目 前傳染法報告病例 監(jiān)測性病,梅毒淋病沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣,,我國主要流行的性傳播疾?。ㄐ圆。?沙眼衣原體: 30%～50%生殖支原體: 10%～40% 其它: 20%～30%,梅毒淋病

3、HIV/AIDS,,,,性病實驗室檢測方法規(guī)范化,方法、試劑評估 技術(shù)規(guī)范臨床應(yīng)用：敏感性、特異性疾病篩查：快速、簡便、敏感血液篩查：大通量、高敏感流行病學調(diào)查：取材方便、人員培訓管理骨干培訓技術(shù)培訓,,主要常見性病實驗室檢測介紹,梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹 陰道滴蟲病 細菌性陰道病 生殖器念珠菌病,,,一、梅 毒,全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范,7,梅毒及其病原體樣品的采集和處理病原學檢

4、測血清學檢測核酸檢測實驗室生物安全梅毒血清學檢測實驗室質(zhì)量管理,,常用梅毒檢測方法,病原學檢測血清學檢測,,病原學檢查,原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。方法：病原學檢查的主要方法有暗視顯微鏡檢查、鍍銀染色法和直接熒光法,,,病原學檢查的臨床意義,病原學方

5、法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，,,梅毒血清學檢測分類,(1) 非梅毒螺旋體抗體檢測試驗（非特異性梅毒抗體）(2) 梅毒螺旋體抗體檢測試驗（特異性梅毒抗體）兩類方法。,,非梅毒螺旋體抗體試驗,1、原理： 梅毒螺旋體感染人體后，宿主會產(chǎn)生

6、抗類脂抗原的抗體，可檢測梅毒患者血中的抗類脂抗原的抗體 2、方法： 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 (RPR) 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST） 性病研究實驗室試驗 (VDRL)等。,,RPR結(jié)果,,,非梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義,非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或

7、再感染的指征。,,梅毒螺旋體抗體試驗,1、原理：用梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體 2、方法： 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA） 化學發(fā)光試驗 梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測 (TP-RT) FTA-ABS 梅毒IgM抗體檢測（TP-IgM） 梅毒螺旋體

8、蛋白印跡試驗（TP-WB）等,,梅毒螺旋體抗體試驗臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結(jié)果進行診斷。,,非梅毒螺旋體抗體試驗結(jié)果解釋示意圖,,,,,,,,,,,,,,,,早期,晚期,一期,二期,早期潛伏,,,,晚期

9、潛伏,三期,治療前 治療后,陽性,陰性,,梅毒螺旋體抗體試驗結(jié)果解釋示意圖,,,,,,,,,,,,,,,,,,,早期,一期,,二期,早期潛伏,,晚期,,晚期潛伏,,三期,,治療前 治療后,陽性,陰性,,梅毒血清學試驗結(jié)果的臨床意義總匯,USR TPPA 意義 RPR TP-ELISA VDRL TP-

10、RT _ _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生

11、 的嬰兒除外) + - 生物學假陽性 - + 早期梅毒經(jīng)治療后,梅毒血清學檢測意義,檢測目的:臨床診斷、血液篩查、流行病學監(jiān)測以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀

12、況。以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以流行病學監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學感染率和發(fā)病率。,,梅毒血清學檢測檢測策略及要求,檢測策略以臨床診斷為目的兩種策略 以血液篩查為目的的檢測策略 以流行病學監(jiān)測為目的的三種檢測策略檢測要點根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。可采用任何一類梅毒血清學檢測方法作為篩查試驗。檢測試劑要求所有應(yīng)用于臨床的檢測試劑均必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、在有效期內(nèi)的

13、試劑，有批批檢合格證的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。,,,二、淋 病,常用淋病檢測方法,直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌,,直接顯微鏡檢查,原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黃白色膿性分泌物，其多形核白細胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。方法：革蘭染色為一傳統(tǒng)方法，革蘭染色將菌分為二大類，即染成紫色的革蘭陽性菌及染成紅色的革蘭陰性菌。,,直接顯微鏡檢查的臨床意義,男性淋菌性尿道炎的尿道標本 敏感性及特異性可高

14、達95%～99%，具診斷價值。宮頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時 敏感性僅40～70%。 不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部淋球菌感染。 亦不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證。,,淋球菌培養(yǎng),1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點：敏感性 81~100

15、%。 特異性 100% —,,淋球菌培養(yǎng),培養(yǎng)條件 ： 35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。 CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應(yīng)使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時間：24~48小時,,淋球菌的初步鑒定,初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗革蘭染色,,淋球菌培養(yǎng)的臨床意義,培養(yǎng)法為診斷淋病的金標準.

16、用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗。,,,生殖道沙眼衣原體感染,生殖道沙眼衣原體感染簡介,50年代,80年代,,,梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫,梅毒淋病軟下疳性病性淋巴肉芽腫非淋菌性尿道炎生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS,2007年后,梅毒淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖器皰疹尖銳濕疣HIV/AIDS,,,常用生殖道衣原體感染檢測方法,抗原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELI

17、SA） 免疫層析快速檢測核酸檢測,,酶聯(lián)免疫吸附試驗,1、原理：于衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測衣原體抗原。2、方法特點 敏感性：79－97％ 特異性: 97－99％試驗結(jié)果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標本采集不當?shù)木壒?,結(jié)果判讀客觀性強，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應(yīng)

18、用時，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。,,酶聯(lián)免疫吸附試驗臨床意義,抗原快速檢測,1、 原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測標本中的沙眼衣原體抗原。2、方法特點簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位標本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果,,抗原快速檢測臨床意義,該方法主要適用于女性患者宮頸標本的檢測，敏感性較低。該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實驗室開展。,,核酸擴增檢測,1、

19、原理：核酸擴增技術(shù)是通過擴增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)粒、染色體和RNA）檢測病原體。2、方法包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、等溫鏈置換擴增技術(shù)（SDA）、轉(zhuǎn)錄介導擴增技術(shù)（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實時熒光PCR。,,核酸擴增檢測臨床意義,核酸擴增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標準”。核酸擴增檢測不僅可用于宮頸、尿道標本中沙眼衣原體的檢

20、測，也可用于男女性尿液標本的檢測。 開展核酸檢測的實驗室應(yīng)通過有關(guān)部門考核取得開展臨床核酸檢測技術(shù)資格證。,,方法評價,核酸檢測 是目前為止最好的檢測方法－但存在檢測敏感性 上的局限性ELISA抗原檢測 嚴格按操作說明進行操作－是非常好的檢測方法 高通量，自動化快速抗原檢測 操作時間短，單人份操作，但敏感性極低,,生殖器皰疹,常用生殖器皰疹檢測方法,抗

21、原檢測抗體檢測,,抗原檢測,1、原理：將HSV特異性單克隆抗體包被在酶標板微孔壁上，捕獲標本中的HSV抗原，形成抗原抗體復合物，繼而與酶標記的二抗結(jié)合，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測HSV。2、方法：ELISA為目前臨床上HSV抗原檢測的常用方法之一,,抗原檢測臨床意義,生殖器皰疹感染的臨床表現(xiàn)變化多樣，臨床診斷的準確性不足50%～70%，通過實驗室檢測手段可確證HSV感染,,抗體檢測,原理：將HSV特異性抗原包被在酶標板微孔底上，捕獲標本中

22、的HSV抗體，形成抗原抗體復合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測HSV抗體。方法：有檢測IgG 和IgM 兩種ELISA方法,,抗體檢測臨床意義,檢測抗HSV抗體的血清學試驗可用于證實既往HSV感染、回顧性診斷原發(fā)性感染，對恢復期或復發(fā)性生殖器皰疹的診斷意義不大。HSV型特異性血清學抗體檢測是發(fā)現(xiàn)亞臨床無癥狀生殖器HSV感染者的手段之一。,,顯微鏡檢查：生理鹽水濕片法（幻燈）染色法 特點:簡便、快速、價廉

23、 敏感性只有38%～82%滴蟲培養(yǎng)是診斷滴蟲病的金標準,敏感性達95%,,陰道滴蟲病,細菌性陰道病,均質(zhì)稀薄的白色陰道分泌物pH>4.5胺臭味試驗陽性線索細胞陽性符合上述4項中3項為陽性可診斷BV,,Amsel綜合臨床體征指標,生殖器念珠菌病,直接涂片 鏡下見念珠菌略帶綠色折光的假菌絲和成群的卵圓形孢子或芽生孢子，直徑約3～5μm。假菌絲節(jié)間有明顯的狹窄部，芽孢往往集中于菌絲分隔處，偶爾可見到分隔的真菌絲。