1、本論文由兩部分組成。第一部分研究了水稻中體細(xì)胞克隆的多樣性。首先我們用RAPD和ISSR兩種分子標(biāo)記檢測了梗稻基因型日本晴基因組發(fā)生體系胞克隆變異的多樣性，然后我們對檢測到的能代表基因組多樣性的帶進行測序，已知的水稻基因組的全序列為我們進行序列分析提供很大的方便。最后，我們用位點特異的PCR擴增的方法對MITE類轉(zhuǎn)座子mPing的轉(zhuǎn)座活性進行了分析。所得的數(shù)據(jù)表明在所選的24個RAPD引物和20個ISSR引物中，培育兩年的愈傷組織和它們

2、的再生植株表現(xiàn)出適中水平的基因組多態(tài)性(分別為20.83％和17.04％)。為了檢測DNA甲基化在體細(xì)胞克隆多樣性中的作用，愈傷組織用5-氮胞苷進行處理，5-氮胞苷通過抑制DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的活性降低胞嘧啶的甲基化水平。雖然由處理后的愈傷再生的植株出現(xiàn)矮小的表型(藥物處理的一個特點)，但在體細(xì)胞克隆多樣性上和對照相比，處理后的愈傷和它們的再生植株只有微小的頻率增加。mPing在處理和非處理的愈傷中都是不轉(zhuǎn)座的。然而，基于Jacard的參數(shù)

3、計算用UPGMA方法構(gòu)建的ISSR帶的系統(tǒng)樹表明用5-氮胞苷處理的和非處理的體細(xì)胞克隆分屬兩個不同的群，說明該處理對基因組改變的一個可能的直接影響取決于我們所選的標(biāo)記方法。序列分析顯示了一個低水平的多樣性(0.31％)，其中主要發(fā)生的是單堿基的替換。 第二部分研究了V14，V27和R09三個在布隆迪廣泛種植的秈稻栽培品種。這三個品種經(jīng)過組織培養(yǎng)，并通過甲基化敏感的多態(tài)性擴增(MSAP)方法研究DNA胞嘧啶的甲基化變化。5個水稻的

4、再生株系，2個細(xì)胞培養(yǎng)系和它們的母本栽培系做17個引物組合的MSAP，在組織培養(yǎng)過程中，所有三個品系的DNA發(fā)生了甲基化，發(fā)現(xiàn)變異的頻率和基因型相關(guān)。DNA甲基化變化頻率遞減的順序依次是：V27、V14、R09；V27品系顯現(xiàn)出更多的去甲基化的位點。在體細(xì)胞中相對于每個品系的親本共有四種甲基化變化的類型產(chǎn)生。B2，D1，C1，D3和A1類型在V14品系中出現(xiàn)總共計229個位點的變化；然而D1，A1，C1和B1類型在V27品系中出現(xiàn)總共計

5、241個位點的變化；D1，C1和D2類型在R09品系中出現(xiàn)總共計203個位點的變化。DNA甲基化的變異亦按照以上相同的順序遞減。BlastN和BlastX的結(jié)果表明在23個獨立的位點中，19個序列片段顯示沒有明顯的相似性，而其余4條雖然不是功能基因片段或反轉(zhuǎn)座子，但是推測可能為蛋白和轉(zhuǎn)座子。為了研究mPing轉(zhuǎn)座子的DNA甲基化變化，選擇兩個基因型的體細(xì)胞系和各自的親本做轉(zhuǎn)座子展示分析，結(jié)果表明mPing轉(zhuǎn)座子的插入頻率要比刪除的高，品