1、膜蛋白質(zhì)組學(xué)在毒理學(xué)研究中的應(yīng)用膜蛋白質(zhì)組學(xué)在毒理學(xué)研究中的應(yīng)用黃愛博12、洪文旭1、許華2、劉建軍11深圳市疾病預(yù)防控制中心深圳市現(xiàn)代毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東深圳518055；2暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東，廣州，郵編510632基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（21102094）；廣東省醫(yī)學(xué)科研基金（A2012577）；深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目（201102100）；深圳市科技研發(fā)資金基礎(chǔ)研究計(jì)劃資助項(xiàng)目（JCYJ20130329161137543）作者

2、簡介：黃愛博，（1989），男，碩士研究生，主要從事蛋白質(zhì)組學(xué)研究。通訊作者：劉建軍，email:bioresearch@摘要：摘要：膜蛋白是細(xì)胞膜的重要組成部分，執(zhí)行著細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)交換、細(xì)胞識(shí)別與免疫應(yīng)答、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控，以及能量傳遞等重要功能。隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，膜蛋白質(zhì)組學(xué)成為毒理蛋白質(zhì)組學(xué)研究的重要組成部分，為在膜蛋白水平闡明毒理機(jī)制和建立毒理評(píng)估模型提供了新的途徑。本文綜述了近年來膜蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)進(jìn)展以及其在一些毒理學(xué)

3、研究中的應(yīng)用。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：膜蛋白質(zhì)；蛋白質(zhì)組學(xué)；毒理學(xué)皮細(xì)胞質(zhì)筏高疏水性多肽的分離[15]。由RCP，CEX和親水相互作用色譜材料可對(duì)MudPIT進(jìn)行改進(jìn)。滯留在柱子上的肽段可被不同的緩沖液按梯度洗脫下來[16]。膜蛋白常被同時(shí)磷酸化和糖基化。這就是不同模式親和色譜被用于肽段分級(jí)純化的原因[17]。固定金屬親和色譜（IMAC）和免疫親和色譜（IAC）可分離胰蛋白酶酶切的磷酸化肽段。通常情況下，IMAC可與RPC及CEX聯(lián)用進(jìn)而對(duì)磷酸

4、化肽段分離，再用電噴霧時(shí)間飛行串聯(lián)質(zhì)譜（ESIQTOFMSMS）進(jìn)行鑒定。O和N連接的糖肽類常被附有固定凝集素的親和色譜進(jìn)行富集。IAC常被用做從復(fù)雜混合物中分離純化特殊蛋白和蛋白混合物[18]。IAC分離純化鱗狀癌細(xì)胞系的磷酸酪氨酸信號(hào)網(wǎng)絡(luò)蛋白分子。進(jìn)而用CEXRPC分離胰酶酶切所得肽段，并結(jié)合MALDIMS進(jìn)行鑒定。樣品用不同的去垢劑和離液劑溶解后，結(jié)合2DE和熒光差異雙向電泳（2DDIGE）技術(shù)分析。上述方法已被用于疏水和翻譯后修

5、飾蛋白的分析[19]。16BACSDSPAGE比傳統(tǒng)2DE（IEFSDSPAGE）在整合膜蛋白的分辨率和范圍上具有顯著的優(yōu)勢，已被應(yīng)用到分離疏水性膜蛋白。膜蛋白包含共價(jià)結(jié)合的糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨定物。GPI一般需特定的方法處理，因GPI與膽固醇和鞘糖脂相連，并聚集在質(zhì)筏上，在細(xì)胞膜溶解過程中，對(duì)TritonX100具有抗性[20]。磷脂酶C可特定地移除膜錨定物，運(yùn)用兩相萃取法分離后，去除TritonX114。GPI錨定蛋白留在富含

6、去垢劑的相中，磷脂酶C作用GPI，GPI溶解度增加，進(jìn)入水相并從質(zhì)筏殘余疏水蛋白中分離。上述方法一般用作GPI錨定蛋白純化的第一步，在第二步中，電泳分離消化蛋白和LCMSMS鑒定?？蓪?duì)整個(gè)蛋白混合物進(jìn)行三氯乙酸（TCA）沉淀并進(jìn)行蛋白消化和LCMSMS鑒定。也可用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDITOFMS）和（基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜）MALDIQTOFMSMS鑒定[21]。1.2膜蛋白裂解為肽段選擇合適的方法將