1、血細(xì)胞分析儀器,,血細(xì)胞分析儀,一、血細(xì)胞分析儀分型 半自動 全自動 工作站 光電型 激光型 電阻抗型等 二分群 三分群 五分群 +網(wǎng)織紅,二、電阻抗基本原理 根據(jù)血細(xì)胞的非傳導(dǎo)性的性質(zhì)，以對電解質(zhì)溶液中懸浮顆粒在通過計數(shù)小孔時引起的電阻變化進行檢測為基礎(chǔ)，這一原理的應(yīng)用實現(xiàn)了血細(xì)胞計數(shù)的自動化，此方法稱為庫爾特原理,血細(xì)胞分析儀,電阻抗基本原理,,,,電阻抗基本原理,電阻抗法白細(xì)胞分群從電阻抗的原理

2、可以看出不同體積的白細(xì)胞通過小孔時，產(chǎn)生的脈沖大小不同，而不同類型的白細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞)經(jīng)溶血作用后有明顯的差異，因此根據(jù)脈沖的大小，即可人為地將血中的白細(xì)胞分成幾群,電阻抗法,白細(xì)胞分類原理經(jīng)過溶血劑處理后的白細(xì)胞根據(jù)體積大小可以初步確認(rèn)其相應(yīng)的種類：第一群〔小細(xì)胞群)是淋巴細(xì)胞(LYM)，第二群是單個核細(xì)胞區(qū)(MONO)，也被稱為中間細(xì)胞(MID)；相當(dāng)于粒細(xì)胞的細(xì)胞群(GRAN)位于第三群(大細(xì)胞群)35

3、-90fl的顆粒被計數(shù)為淋巴細(xì)胞，90-160fl的顆粒計數(shù)為單個核細(xì)胞，160fl以上的顆粒計數(shù)為粒細(xì)胞,,,紅細(xì)胞計數(shù)原理,原理同白細(xì)胞檢測，紅細(xì)胞通過小孔時，形成相應(yīng)大小的脈沖，脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目，脈沖的高低代表單個脈沖細(xì)胞的體積,血紅蛋白測定原理,被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血劑中有關(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白的衍生物，進入血紅蛋白測試系統(tǒng)，在特定波長(一般在530—550nm）下比色，吸光度變化

4、與液體中血紅蛋白含量成正比,血小板測定原理,血小板隨紅細(xì)胞一起在一個系統(tǒng)中進行檢測根據(jù)不同的閾值、計算機分別給出血小板與紅細(xì)胞數(shù)目,,檢測流程,血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果,直方圖分析,紅細(xì)胞直方圖白細(xì)胞直方圖血小板直方圖,（一）紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用 1.小細(xì)胞性貧血（1）RDW正常：輕型地中海貧血 （2）RDW輕度增高：缺鐵性貧血 （3）RDW明顯增高，兩個細(xì)胞峰，小細(xì)胞峰明顯左移：鐵粒幼細(xì)胞性貧血、缺鐵性貧血經(jīng)治療有

5、效,正常紅細(xì)胞,小紅細(xì)胞大小不均,2.大細(xì)胞性貧血(1) RDW正常，細(xì)胞主峰明顯右移：溶血性貧血白血病前期再生障礙性貧血巨幼細(xì)胞性貧血(2) RDW輕度增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，基底增寬：葉酸、維生素B12缺乏性巨幼細(xì)胞性貧血。(3)RDW明顯增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，出現(xiàn)兩個峰： 巨幼細(xì)胞貧血，葉酸、維生素B12治療初。,巨紅細(xì)胞且大小不均,巨幼細(xì)胞性貧血治療有效,3.正細(xì)胞性貧血 （1）RDW正常：慢性病

6、急性失血骨髓纖維化骨髓發(fā)育不良 (2) RDW輕度增高：血紅蛋白異常骨髓纖維化 （3） RDW明顯增高： 早期或混合性營養(yǎng)不良,（二）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用直方圖只能提示白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。 1.中性粒細(xì)胞增高(淋巴細(xì)胞相對減低) 嗜中性粒細(xì)胞增多淋巴細(xì)胞減低癥,正常白細(xì)胞,淋巴細(xì)胞減少和中性粒增多,（二）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用直方圖只能提示

7、白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。 2.中性粒細(xì)胞減低（淋巴細(xì)胞比例增高）嬰幼兒再生障礙性貧血嗜中性粒細(xì)胞缺乏癥淋巴細(xì)胞增多癥傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性淋巴細(xì)胞白血病,淋巴細(xì)胞增多和中性粒減少,3.嗜酸性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞 淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間區(qū)域異常?？赡艽嬖冢寒愋土馨图?xì)胞、漿細(xì)胞，原始細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞等。 4.急性白血病 白血病細(xì)胞在某一區(qū)域出高大細(xì)胞峰，

8、同時有報警。5.慢性白血病 在單個核細(xì)胞區(qū)和嗜中性粒細(xì)胞區(qū)左側(cè)范圍有一高大的細(xì)胞峰。,原始、幼稚白細(xì)胞增多,中間細(xì)胞（單個核細(xì)胞）,單個核細(xì)胞（中間細(xì)胞）,（三）血小板直方圖臨床應(yīng)用 1. 紅細(xì)胞碎片 可干擾血小板直方圖2. 血小板聚集 直方圖峰左側(cè)起點較高MCV和RDW正常，可排除小紅細(xì)胞干擾 3. 小紅細(xì)胞干擾 峰右側(cè)離橫坐標(biāo)較高，呈脫尾狀。 4. 小血小板 峰左移，MPV偏小。血涂片可見

9、較多小血小板。,血小板直方圖,大血小板增多,聯(lián)合檢測型血細(xì)胞分析儀,一、容量、電導(dǎo)、光散射（VCS） 體積 電阻抗 血細(xì)胞計數(shù)、體積測量 電導(dǎo)性 電磁探針 內(nèi)部結(jié)構(gòu) 光散射 激光器 顆粒的構(gòu)型、質(zhì)量,Coulter maxm,,容量、電導(dǎo)、光散射（ VCS）檢測,VCS 計數(shù)技術(shù)可使血細(xì)胞未經(jīng)任何處理，在與體內(nèi)形態(tài)完全相同的自然狀態(tài)下得出檢測結(jié)果。首先在標(biāo)本中加入只作用紅細(xì)胞的溶血劑使紅細(xì)胞溶解，然后

10、加入抗溶血劑起中和前溶血劑的作用，使白細(xì)胞表面、胞質(zhì)及細(xì)胞大小等特征仍然保持與體內(nèi)相同狀態(tài)，接受VCS三種技術(shù)同時檢測,檢 測 原 理,體積（V）測量使用的是電阻抗法，脈沖峰大小決定細(xì)胞體積，脈沖的數(shù)量決定于細(xì)胞數(shù)量電導(dǎo)性（C）根據(jù)細(xì)胞壁能產(chǎn)生高頻電流的性能采用高頻電磁探針，測量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)的比例，細(xì)胞內(nèi)質(zhì)粒大小和密度光散射（S）在10°~70°對每一個細(xì)胞掃描分析，提供細(xì)胞結(jié)構(gòu)（核分葉、核

11、形態(tài)），特別是對細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和質(zhì)量的鑒別,三維分析技術(shù),將檢測過的8,192個細(xì)胞分布到一個以V、C、S為三維坐標(biāo)的空間內(nèi)，顯示出細(xì)胞群特征。高智能的計算機軟件分析細(xì)胞群的位置、相對密度、輪廓和大小。三維坐標(biāo)的數(shù)據(jù)分析位點多過16×106個。,,聯(lián)合檢測型血細(xì)胞分析儀,二、電阻抗、射頻、細(xì)胞化學(xué)嗜酸性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)嗜堿性粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)淋巴、單核和粒細(xì)胞檢測系統(tǒng)幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng),SE-9000,,淋巴、單核和粒細(xì)胞

12、檢測系統(tǒng),采用電阻抗與射頻聯(lián)合檢測直流電及射頻兩種電流．直流電不能透過細(xì)胞漿，僅能測量細(xì)胞大小，而射頻可透入細(xì)胞內(nèi)，測量核大小及顆粒的多少，因此細(xì)胞進入小孔時產(chǎn)生兩個不同的脈沖信號脈沖的高低分別代表細(xì)胞的大小(Dc)和核及顆粒的密度(RF)，以DC信號為橫坐標(biāo)，RF為縱坐標(biāo)，就可根據(jù)兩個信號作為一個細(xì)胞定位于二維的細(xì)胞散射圖,,,幼稚細(xì)胞檢測系統(tǒng),原理 幼稚細(xì)胞膜上脂質(zhì)較成熟細(xì)胞少，在細(xì)胞懸液中加入硫化氨基酸，結(jié)合在

13、幼稚細(xì)胞上的氨基酸較成熟細(xì)胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當(dāng)加入溶血劑，成熟細(xì)胞溶解，而幼稚細(xì)胞不受破壞,三、多角度激光散射、電阻抗 檢測細(xì)胞在多個角度的散射光的強度，反映細(xì)胞的大小、核形、核質(zhì)比以及顆粒的性質(zhì),聯(lián)合檢測型血細(xì)胞分析儀,SF-3000血細(xì)胞分析儀,多角度激光反應(yīng),細(xì)胞分類原理 采用半導(dǎo)體激光及流式原理從兩個角度分析白細(xì)胞，低角度（1°~6°）散射光分析白細(xì)胞體積大小，

14、高角度散射光（8°~20°）分析白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu),內(nèi)部,1°-6°,8°-20°,四、激光與細(xì)胞化學(xué)檢測原理 Bayer ADVIA 120利用激光散射和過氧化物酶染色技術(shù)白細(xì)胞計數(shù)及分類嗜堿性粒細(xì)胞/分葉核粒細(xì)胞測量紅細(xì)胞/血小板測量血紅蛋白測量,聯(lián)合檢測型血細(xì)胞分析儀,ADVIA 120,,過氧化物酶通道,嗜堿細(xì)胞／分葉核通道,,嗜堿細(xì)胞/分葉核通道白細(xì)胞分類原

15、理圖1.噪音 2.幼稚細(xì)胞核 3. 單個核白細(xì)胞 （單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞） 4.嗜堿性粒細(xì)胞 5. 可疑嗜堿性粒細(xì)胞 6.飽和度 7.多核白細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞）,血小板檢測原理,網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測原理,四、方法學(xué)評價 （一）儀器類型和特點 1.單純電阻抗法三分群血液分析儀特點 （1）檢測參數(shù)：紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板 （2）白細(xì)胞分類 （3）直方圖 （4）報警(flag)功能：文字、圖標(biāo),2.

16、綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點 （1）檢測參數(shù)：紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板網(wǎng)織紅細(xì)胞幼稚細(xì)胞,（2）白細(xì)胞分類五分類，準(zhǔn)確性較三分群血液分析儀高。 （3）直方圖和散點圖：紅細(xì)胞直方圖白細(xì)胞直方圖血小板直方圖白細(xì)胞分類散點圖。（4）報警功能：文字、圖標(biāo),3.自動化程度 操作過程：半自動、全自動儲存信息：質(zhì)量控制：質(zhì)量控制軟件、顯示質(zhì)控圖形 至今，血液分析儀還只能用作健康人血液篩檢之用，尚不能完全

17、代替顯微鏡功能。,(二)儀器性能評價（ICSH） 1. 可比性 (comparability) 指血液分析儀測定結(jié)果，與常規(guī)方法所測結(jié)果相比較。顯微鏡法是血細(xì)胞檢驗基礎(chǔ)。P＞0.05有可比性。P＜0.05無可比性結(jié)論：計數(shù)細(xì)胞越多、選用吸管、計數(shù)盤越多，計數(shù)結(jié)果接近真值。實際工作中，鏡檢法很難達到此要求。,經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀：計數(shù)細(xì)胞多操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化精確性高（ CV可＜2%）準(zhǔn)確性較高,2. 準(zhǔn)確性

18、(accuracy) 準(zhǔn)確性是指測定結(jié)果與真值一致性的程度。 3. 總重復(fù)性( overall precision ) 指同一份標(biāo)本多次測量的結(jié)果接近的程度。重復(fù)測定1份抗凝靜脈血10次，計算CV值。,4.精密度 (precision) 批內(nèi)（within- batch）精密度：同一批樣本重復(fù)測定結(jié)果的評價。批間(between-batch)精密度：對兩批或兩批以上樣本重復(fù)測定結(jié)果的評價。 攜帶污染率(

19、carry over)：連續(xù)測定1份高值樣本3次（i1、i2、i3）再測定1份低值樣本3次（j1、j2、j3） 攜帶污染率（%）＝（j1-j3）/（i3-J3）,精確度和準(zhǔn)確度,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,5. 線性范圍 指測定值與稀釋倍數(shù)是否呈比例關(guān)系。線性關(guān)系范圍越寬越理想。P ＜ 0.01, 非線性相關(guān)。 P ＞ 0.05，未偏離線性。,（三）影響直方圖變化的因