1、免疫學的臨床應用,免疫診斷免疫治療免疫預防,免疫學診斷,一、抗原或抗體的檢測,二、淋巴細胞的測定,三、免疫學檢測方法的應用,免疫學診斷,（一）抗原抗體反應的原理,免疫學診斷,一、抗原或抗體的檢測,1、抗原抗體反應的 特異性（1）特異性：基于兩 種分子間 的結(jié)構(gòu)互補性和親和性。（2）可逆性（3）適宜的條件：電解質(zhì)、pH、溫度等,2、抗原抗體反應的可見性 抗原抗體按適當比例結(jié)合，形成肉眼可見的現(xiàn)

2、象。,應 用,1、利用已知抗原檢測未知抗體,（1）檢測病原微生物的相應抗體以輔助診斷疾?。?傷寒病、流行性乙型腦炎、AIDS病等。（2）檢測自身抗體——診斷自身免疫病：SLE、類風濕性關(guān)節(jié)炎等,2、利用已知抗體檢測未知抗原,（1）鑒定病原菌：診斷疾病（2）檢測腫瘤相關(guān)抗原：檢測甲胎蛋白以診斷肝癌（3）檢測血型抗原、HLA抗原：鑒定血型，親子鑒定（4）檢測藥物半抗原： 確認運動員是否服用興奮劑,（二） 抗原或抗體的檢測方法,

3、凝集反應沉淀反應補體參與的抗原抗體反應免疫標記技術(shù),（一）凝集反應（agglutination）,顆粒性抗原（紅細胞、細菌、 乳膠顆粒等）與抗體特異性結(jié)合，形成肉眼可見的凝集塊。,1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、試管凝集2、間接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳膠顆?；蚣t細胞表面，與相應 抗 體混合出現(xiàn)的凝集

4、現(xiàn)象。3、抗球蛋白試驗（Coombs試驗） 抗原與單價抗體（不完全抗體）結(jié)合不出現(xiàn)凝集塊，再加入抗球蛋白后即形成凝集塊。 用于檢測抗Rh抗體以診斷新生兒溶血性貧血。,乳膠顆粒,,紅細胞,,,類風濕因子檢測妊娠試驗,間接凝集,直接凝集,,（二）沉淀反應（precipitation）,可溶性抗原（免疫球蛋白、細胞裂解物、組織浸液等）與相應抗體結(jié)合， 形成不溶性免疫復合物，出現(xiàn)不透明的沉淀物。多在半固體瓊脂凝膠上進行，形成白色的沉淀。

5、可分為單向免疫擴散試驗、雙向免疫擴散試驗、免疫電泳、免疫比濁法等。,免疫比濁法：快速簡便。用于血清IgG、IgA、IgM、 補體C3、C4含量測定,（三）補體參與的抗原抗體反應,1、50 %補體溶血試驗（CH50測定） ——血清總補體量測定,2、補體結(jié)合試驗(complement fixation test)：檢測抗原或抗體。原理：用已知的指示系統(tǒng)檢測試驗系統(tǒng)是否結(jié)合補體進行診斷,試驗原理？,檢測系統(tǒng)：待測樣品和已知

6、抗原（或抗體）,指示系統(tǒng)：SRBC和溶血素,溶血—陰性；不溶血—陽性,用標記物標記抗體或抗原進行抗原抗體反應借以提高免疫學診斷的敏感性,熒光素 ：異硫氰酸熒光素（黃綠色熒光）、藻紅蛋白、 羅丹明（紅色熒光）,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶,免疫熒光檢測法（IFA）,放射免疫檢測法（RIA）,酶免疫檢測法（EIA）,（四）免疫標記技術(shù),液相（ELISA）、固相（免疫組化技術(shù)）,直接熒光法,間接熒光法,免

7、疫熒光技術(shù),間接法雙抗夾心法競爭法E: 辣根過氧化酶 HRPS: 底物 二氨基聯(lián)苯胺 DAB/鄰苯胺,酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA法）,間接法,,,,,,,,,,,DAB,,雙抗夾心法,,,,,,,,DAB,,BAS-ELISA法（ biotin-avidin-system，生物素-抗生物素系統(tǒng)-ELISA法）：敏感性更高。用于抗原抗體以及DNA、R

8、NA的檢測。,卵白及某些微生物中的蛋白質(zhì),,,靈敏度達pg水平。常用于微量物質(zhì)測定，如胰島素、生長激素、甲狀腺素、孕酮等激素、嗎啡、地高辛等藥物以及IgE等。,放射免疫檢測法（RIA）,競爭法,,,能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量，常用于檢測多種病毒的抗體或抗原，如抗HIV抗體的檢測。,免疫印跡法,二、淋巴細胞的測定,（一）淋巴細胞的分離與類型鑒定,1、淋巴細胞的分離：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法,白膜層,單核細胞,淋巴

9、細胞,B,T,,,,吸附分離,過尼龍毛柱分離,,（1）間接免疫熒光法：鑒定細胞的群、亞群。,用CD3、CD4、CD8單克隆抗體檢測患者外周血T細胞表面相應抗原CD3+ ——T細胞，計算T細胞總數(shù)。 CD4+ —— CD4+T細胞，計算CD4+T細胞數(shù)。 CD8+——CD8+ T細胞，計算 CD8+亞群T細胞數(shù) 計算CD4+ / CD8+比例,正常人PMB中T細胞占65~75% CD4+ / CD8+約為1.5~2,2、淋巴細

10、胞的類型鑒定：淋巴細胞表面標記檢測、 記數(shù),用mIgM、mIgD單克隆抗體檢測患者外周血B細胞表面相應的抗原已檢測B細胞的數(shù)量,正常人外周血中SmIg+ 細胞占8~12%,,（2）流式細胞術(shù)（flow cytometry）,,,（二）淋巴細胞功能測定,1、T細胞功能測定,（1）T細胞增殖試驗（淋轉(zhuǎn)）：絲裂原、抗CD3單克隆抗體 等能非特異地激活T細胞，使之發(fā)生轉(zhuǎn)化增殖，計算淋巴母細胞轉(zhuǎn)化率（正常值65~80%）

11、 。 ①形態(tài)學觀察法 ②3H-TdR滲入法：用液體閃爍儀測定樣品的β射線放射活性 ③MTT法,（2）淋巴細胞介導的細胞毒試驗（LMC） ——檢測CTL、NK、 LAK、TIL細胞殺傷靶細胞的功能,（2）抗體形成細胞測定—— 溶血空斑試驗 （hemolytic forming cell assay，HFC）計算HFU/ml,2、B細胞功能測定,（1）B細胞增殖試驗：LPS、SPA刺激，檢查抗體形成

12、細胞 的數(shù)目,可用于鑒定分離的淋巴細胞亞群，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等檢測。①免疫學方法：ELISA、RIA等。 ②細胞生物學方法 ③分子生物學方法，如聚合酶鏈反應（PCR）法等,3、細胞因子檢測,4、體內(nèi)免疫細胞功能測定：皮膚試驗,（1）遲發(fā)型超敏反應：舊結(jié)核菌素試驗（ OT試驗 ） 皮試（+）——有一定的細胞免疫能力

13、 皮試（—）——細胞免疫功能缺損,（2）速發(fā)型超敏反應：青霉素皮試、 異種血清皮試,免疫治療(immunotherapy),針對機體低下或亢進的免疫狀態(tài)，人為地增強或抑制機體的免疫功能 以達到治療疾病的治療方法稱之。,免疫調(diào)節(jié)（immunomodulation） 利用物理、化學和生物學的手段來調(diào)節(jié)機體的免疫功能，使原有的免疫功能增強或減弱。免疫重建(immunoreconstitution)

14、將免疫功能正常個體的造血干細胞或淋巴細胞移植給患有免疫功能缺陷的個體，使后者的免疫功能全部或部分得到恢復。,,分類,一、免疫增強療法和免疫抑制療法,三、主動免疫治療（active immunotherapy）和被動免疫治療（passive immunotherapy）,二、特異性免疫治療和非特異性免疫治療,（一）免疫增強劑,化學制劑：1、左旋咪唑 2、西咪替丁,微生物制劑：1、卡介苗（BCG）

15、 2、短小棒狀桿菌 3、微生物提取物,中藥制劑： 黃芪、人參、 枸杞子等,免疫增強劑與免疫抑制劑,免疫因子：1、轉(zhuǎn)移因子 2、免疫核糖核酸 3、胸腺肽,適應癥：免疫功能低下的患者 （

16、1）惡性腫瘤 （2）免疫缺陷病 （3）傳染病,副作用：較輕,二、 免疫抑制劑,化學制劑1、烷化劑：環(huán)磷酰胺2、抗代謝藥：激素：糖皮質(zhì)激素真菌代謝產(chǎn)物1、 環(huán)孢素A：對T，尤其是TH有較好的選擇性抑制作用2、FK-506：其作用強于環(huán)孢素A10-100倍，且與環(huán)孢素A有明顯的協(xié)同作用。 中藥及其有效成分雷公藤多甙,免疫抑制

17、藥物的適應癥和副作用,適應癥：免疫功能過高引起機體損害的患者 1、抗移植排斥 2、超敏反應性疾?。杭に?3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎癥：激素,副作用：明顯 ，主要是骨髓抑制、肝腎毒性等 其抑制作用是非特異性的，長期應用

18、可導致：繼 發(fā)性免疫缺陷 、 嚴重感染、 腫瘤,抗體為基礎的免疫治療,一、免疫血清抗毒素血清、胎盤（丙種）球蛋白、抗菌免疫血清、抗病毒免疫血清、抗淋巴細胞丙種球蛋白等,二、單克隆抗體（mAb）：用于靶向治療等。,三、基因工程抗體：降低抗體的免疫原性嵌合抗體、、人源化抗體、單鏈抗體、雙價抗體、雙特異性抗體等,抗原為基礎的免疫治療,細胞因子及其拮抗劑為基礎的免疫治療,LAK（lymphokine

19、activated killer cells）細胞——淋巴因子活化的殺傷細胞。是將外周血淋巴細胞在體外經(jīng)過IL-2培養(yǎng)后誘導產(chǎn)生的一種新型的殺傷細胞，具有更強的殺瘤特性。其殺傷腫瘤細胞不需抗原致敏且無MHC限制性。主要為NK細胞,TIL(tumorinfiltrating lymphocytes)細胞——腫瘤侵潤淋巴細胞。是從實體瘤組織中分離得到的，經(jīng)體外IL-2培養(yǎng)后獲得比LAK細胞更強的殺傷活性。,細胞為基礎的免疫治療,疫苗 ——應

20、用微生物制備的具有免疫原性的物質(zhì)。包括滅活疫苗（死疫苗）和減毒活疫苗。如 麻疹疫苗，脊髓灰質(zhì)炎疫苗，乙肝疫苗等。類毒素——將細菌毒素用甲醛減毒后制備的具有免疫 原性的物質(zhì)。如喉類毒素，破傷風類毒素。,（二）人工被動免疫（ artificial passive immunization ）——是給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑，以治療或緊急預防感染的措施。如抗毒素、人免疫球蛋白制劑、細胞因子制劑、單抗制劑等

21、。,（一）人工主動免疫（artificial active immunization）——用疫苗、類毒素接種機體，使之產(chǎn)生特異性的免疫，從而預防感染的措施。,一、人工免疫,（三）計劃免疫,免疫預防,二、新型疫苗的發(fā)展,三、疫苗的應用,1、抗感染2、抗腫瘤3、計劃生育4、防止免疫病理損傷,復 習 題,一、名詞解釋 凝集反應、沉淀反應、ELISA、人工主動免疫、 人工被動免疫、類毒素、LAK細胞、TIL細胞