1、高效液相色譜高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱，對(duì)供試品進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。注入的供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測(cè)器，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號(hào)。1、對(duì)儀器的一般要求和色譜條件對(duì)儀器的一般要求和色譜條件所用的儀器為高效液相色譜儀。儀器應(yīng)定期檢定并符合有關(guān)規(guī)定。（1）色譜柱色譜柱反相色譜系統(tǒng)使用非極性添充劑，常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠，以十八烷基硅烷鍵合硅

2、膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類(lèi)型的硅烷鍵合硅膠（如氰基鍵合硅烷和氨基鍵合硅烷等）也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換色譜使用離子交換填充劑；分子排阻色譜使用凝膠或高分子多孔微球等填充劑；對(duì)映異構(gòu)體的分離通常使用手性填充劑。填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類(lèi)型等）以及色譜柱的填充，直接影響供試品的保留行為和分離效果。分析分子量小于2000的化合物應(yīng)選擇

3、孔徑在15nm（1nm=10）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物則應(yīng)選擇孔徑在30nm以上的填料。.除另有規(guī)定外，普通分析柱的填充劑粒徑一般在3～10μm之間，粒徑更小（約2μm）的填充劑常用于填裝微徑柱（內(nèi)徑約2mm）。使用微徑柱時(shí)，輸液泵的性能、進(jìn)樣體積、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配；如有必要，色譜條件也需作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)對(duì)其測(cè)定的結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí)，應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。以硅膠為載體的鍵合固定相的

4、使用溫度通常不超過(guò)40℃，為改善分離效果可適當(dāng)提高色譜柱的使用溫度，但不宜超過(guò)60℃。流動(dòng)相的PH值應(yīng)控制在2～8之間。當(dāng)pH大于8時(shí)，可使載體硅膠溶解；當(dāng)pH小于2時(shí)，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當(dāng)色譜系統(tǒng)中需使用PH大于8的流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)選用耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠填充劑、包覆聚合物填充劑、有機(jī)無(wú)機(jī)雜化填充劑或非超過(guò)10%為限，如30%相對(duì)改變量的數(shù)值超過(guò)總量的10%時(shí)，則改變量以總量的10

5、%為限。對(duì)于必須使用特定牌號(hào)的填充劑方能滿(mǎn)足分離要求的品種，可在該品種項(xiàng)下注明。2、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等四個(gè)參數(shù)。其中，分離度和重復(fù)性尤為重要。按各品種項(xiàng)下要求對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液在規(guī)定的色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，必要時(shí)，可對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行調(diào)整，以符合要求。（1）色譜柱的理論板數(shù)色譜柱的理論板數(shù)(n)用于評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能。由于

6、不同物質(zhì)在同一色譜柱上的色譜行為不同，采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì)，一般為待測(cè)組分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的理論板數(shù)。在規(guī)定的條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間tR（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）和峰寬（W）半峰高寬（Wh2），按n＝16（tRW）2或5.54(tRWh2)2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。（2）分離度（）分離度（R）用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分與相鄰共存

7、物或難分離物質(zhì)之間的分離程度，是衡量色譜系統(tǒng)效能的關(guān)鍵指標(biāo)?？梢酝ㄟ^(guò)測(cè)定待測(cè)物質(zhì)與已知雜質(zhì)的分離度，也可以通過(guò)測(cè)定待測(cè)組分與某一添加的指標(biāo)性成分（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)或其他難分離物質(zhì)）的分離度，或?qū)⒐┰嚻坊驅(qū)φ掌酚眠m當(dāng)?shù)姆椒ń到?，通過(guò)測(cè)定待測(cè)組分與某一降解產(chǎn)物的分離度，對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)價(jià)與控制。無(wú)論是定性鑒別還是定量分析，均要求待測(cè)峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特定的雜質(zhì)對(duì)照峰之間有較好的分離度。除另有規(guī)定外，待測(cè)組分與相鄰共存物之間的分離度應(yīng)大于1.5。分