1、實驗五實驗五真菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察真菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察真菌分離培養(yǎng)應考慮所分離真菌的特性，配制合適的培養(yǎng)基，選擇所需的氣體環(huán)境。同時由于真菌分離材料常污染有大量細菌，所以可在培養(yǎng)基中加入抗菌素并在分離培養(yǎng)過程中嚴格執(zhí)行無菌操作。目的要求目的要求1掌握真菌分離培養(yǎng)方法。2認識真菌菌落的特征，比較與細菌菌落有何不同。3了解真菌載片培養(yǎng)法。4掌握觀察真菌的基本方法，并觀察其形態(tài)特征。操作步驟操作步驟—、真菌的分離培養(yǎng)方法、真菌的分離培養(yǎng)

2、方法（－）平板劃線分離法1取適合真菌的瓊脂培養(yǎng)基融化，冷至45℃，注入無菌平皿中，每皿15～20ml，制成平板待用。2取要分離的材料（如田土、混雜的或污染的真菌培養(yǎng)物、真菌）少許，投入盛無菌水的試管內(nèi)，振搖，使分離菌懸浮于水中。3將接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌并冷卻后，蘸取上述菌懸浮液，進行平板劃線(同細菌的劃線法)。4劃線完畢，置溫箱中培養(yǎng)2～5d，待長出菌落后，釣取可疑單個菌落先作制片檢查，若只有一種所需要的真菌生長，即可進行釣菌純培養(yǎng)。如有雜

3、菌可從單個菌落中釣少許菌制成懸液，再作劃線分離培養(yǎng)，有時需反復多次，才得純種。另外，也可在放大鏡的觀察下，用無菌鑷子夾取一段待分離的真菌菌絲，直接放在平板上作分離培養(yǎng)，可獲得該種真菌的純培養(yǎng)。（二）稀釋分離法（二）稀釋分離法1取盛有無菌水的試管5支（每管9ml），分別標記1、2、3、4、5號。取樣品（如田土等）1g，投入1號管內(nèi)，振搖，使懸浮均勻。2用1ml滅菌吸管，按無菌操作法，從1號管中吸取1ml懸浮液注入2號管中，并搖勻；同樣由2

4、號管取1ml至3號管，依此類推，直至5號管。注意每稀釋一管應更換一支滅菌吸管。3用2支無菌吸管分別由4號、5號試管中各取1ml懸液，并分別注入2個滅菌培養(yǎng)皿中，再加入融化后冷至45℃的瓊脂培養(yǎng)基約15ml，輕輕在桌面上搖轉(zhuǎn)，靜置，使冷凝成平板。然后倒置溫箱中培養(yǎng)，2～5d后，從中挑選單個菌落，并移植于斜面上。二真菌培養(yǎng)性狀觀察二真菌培養(yǎng)性狀觀察（一）真菌在固體培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)1.酵母菌菌落：酵母菌在固體培養(yǎng)基上多呈油脂狀或蠟脂狀，表面

5、光滑、濕潤、黏稠，有的表面呈粉粒狀、粗糙或皺褶。菌落邊緣有整齊、缺損或帶絲狀。菌落顏色有乳白色、黃色或紅色等。2.霉菌菌落：將不同霉菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2～5d，可見霉菌菌落呈絨毛狀、絮狀、蜘蛛網(wǎng)狀等。菌落大小依種而異，有的能擴展到整個固體培養(yǎng)基，有的有一定的局限性（直徑1～2mm或更?。?。很多霉菌的孢子能產(chǎn)生色素，致使菌落表面、背面甚至培養(yǎng)基呈現(xiàn)不同的顏色，如黃色、綠色、青色、黑色、橙色等。（二）真菌在液體培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)室載片培養(yǎng)