1、實驗十七 偶氮胂Ⅲ法測血鈣,血漿中約含鈣2.1mmol/(8.4～10.2mg/dl)，以三種形式存在：①非擴散鈣(non-difusional calcium)：是指與血漿蛋白相結(jié)合的鈣，占血漿總鈣的45%；②離子鈣(ion calcium)：是具有生理活性的部分，約占血漿總鈣的50%；③絡(luò)合鈣(chelating calcium)：主要指與枸櫞酸結(jié)合的鈣，是體內(nèi)鈣的一種運輸方式，約占血漿總鈣的5%左右。鈣離子和絡(luò)合鈣都能透過毛細(xì)血

2、管壁，故統(tǒng)稱為擴散鈣。血鈣的測定方法很多，一般可分為總鈣測定和離子鈣測定法。前者包括同位素稀釋質(zhì)譜法(isotope diluting mass spectrometry)、原子吸收光譜法(atomic absorption spectroscopy，AAS)、分光光度法(spectrophotography)和絡(luò)合滴定法(chelating titration)等。AAS是最常用的準(zhǔn)確測定血漿總鈣含量的參考方法，但費用昂貴，不適于常規(guī)

3、工作；分光光度法中以甲基百里香酚藍比色法（methyl thymol blue colorimetry）和偶氮胂Ⅲ比色法（Arsenazo Ⅲ colorimetry）最常用。絡(luò)合滴定法簡便易行，但判斷終點受主觀因素影響，有被淘汰趨勢，但不少基層實驗室仍延用。離子選擇電極法測定離子鈣已在臨床廣泛應(yīng)用。分光光度法已被廣泛用自動生化分析議分析。,【實驗原理】 在堿性條件下，樣品中鈣與偶氮胂Ⅲ作用生成藍色復(fù)合物，其顏色深淺與鈣濃

4、度成正比，通過在660nm波長處測定吸光度的變化值，與經(jīng)過同樣處理的鈣校準(zhǔn)液進行比較，即可計算出樣品中鈣含量。,【操作步驟】 測定管（U） 標(biāo)準(zhǔn)管（S） 空白管（B）試劑（ml） 2.0 2.0 2.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml） -- -- 0.02標(biāo)準(zhǔn)液（ml） --

5、 0.02 --血清 0.02 -- -- 混勻，37恒溫2分鐘，660nm波長，以空白管調(diào)零，測定各管吸光度。,,,,【計算】樣品鈣含量（mmol/L）= ×2.50【參考范圍】血清鈣：2.1～2.6mmol/L【臨床意

6、義】 （1）低鈣血癥見于 ①攝入不足和吸收不良：慢性脂肪性腹瀉、阻塞性黃疸；②需要增加：妊娠后期及哺乳期婦女；③吸收減少：佝僂病、甲狀旁腺功能減退癥；④腎臟疾?。杭?、慢性腎衰竭、腎病綜合征、腎小管性酸中毒；⑤壞死性胰腺炎。 （2）高鈣血癥見于 ①攝入鈣過多：靜脈用鈣過量、大量飲用牛奶等；②原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進癥、腎癌等使血鈣升高；③服用維生素D過多，鈣吸收作用增強；④骨?。鹤冃涡怨茄?、轉(zhuǎn)移性骨癌、多發(fā)性骨髓瘤等

7、，骨溶解增加；⑤具有異位內(nèi)分泌作用的腫瘤；⑥長期制動引起骨骼脫鈣。,,【評價】 1. 線性范圍：0.00～6.00mmol/L，γ≥0.99。2. 精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別≤5.0%3. 準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度≤10%4. 試劑空白吸光度值≤0.35。【注意事項】1. 樣品中鈣含量超過5.00mmol/L，則用生理鹽水稀釋后測定，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。2. 測試溫度無嚴(yán)格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。3. 高脂

8、樣本會引起測定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校正。4. 反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定2小時。 5. 所用試驗器材必須清潔，沒有鈣污染。6. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。7. 試劑使用后立即關(guān)緊瓶蓋，避免污染。8. 使用肝素作為抗凝劑時濃度不能太高，每毫升血液中肝素濃度應(yīng)小于50單位。不能使用草酸鹽、枸櫞酸鹽、EDTA等作抗凝劑。,實驗十七 鈣鎂試劑比色法測血鎂【目的要求】1.掌握比色法測血鎂2.熟悉血鎂測定的其他方法【

9、實驗原理】 血清中的鎂在堿性條件下，與金屬色原染料鈣鎂試劑（calmagite)反應(yīng)生成紫紅色絡(luò)合物。顏色深淺與美的濃度成正比，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)品比較，可以求得鎂的含量。,【操作步驟】 測定管（U） 標(biāo)準(zhǔn)管（S） 空白管（B）試劑（ml） 2.0 2.0 2.037℃恒溫5分鐘蒸餾水（ml） --

10、 -- 0.02標(biāo)準(zhǔn)液（ml） -- 0.02 --血清 0.02 -- -- 混勻，37恒溫2分鐘，540nm波長，以空白管調(diào)零，測定各管吸光度。,,,,【計算】樣品鎂含量（mmol/L）=

11、 ×1.0【參考范圍】血清鎂：0.67～1.04mmol/L【評價】 1. 線性范圍：2.0mmol/L±10%。2. 精密度：批內(nèi)、批間平均CV分別≤5.0%3. 準(zhǔn)確度：不準(zhǔn)確度≤10%4. 試劑空白吸光度值≤1.10。,【注意事項】1. 試劑與樣品量可根據(jù)需要按比例改變。2. 測試溫度無嚴(yán)格規(guī)定，但色素對溫度敏感，應(yīng)保持反應(yīng)體系恒溫。3. 高脂樣本會引起測定結(jié)果假性升高，可用樣本空白管校

12、正。4. 反應(yīng)形成的色素可穩(wěn)定1小時。 5. 所用試驗器材必須清潔，沒有鎂污染。6. 所用試劑具有毒性和腐蝕性，請勿用口吸吸管，如有污染，應(yīng)立刻用大量流水沖洗。,實驗十八 還原鉬藍法測血清磷,血液中的磷( phosphorus )主要有兩種形式：有機磷和無機磷。血清無機磷含量與血鈣有一定關(guān)系，兩者濃度的乘積為一常數(shù)（以mg/dl濃度計算，乘積等于40）。磷參與機體糖、脂類及氨基酸的代謝，是骨鹽的主要成分，也是轉(zhuǎn)運能量的物質(zhì)，磷酸

13、鹽是調(diào)節(jié)酸堿平衡的重要緩沖體系之一?！灸康囊蟆?.掌握此法測血磷的原理。2.熟悉血磷測定的其他方法,【實驗原理】 利用磷在酸性溶液中與鉬酸銨反應(yīng)生成磷鉬酸復(fù)合物，用對甲氨基酚硫酸鹽還原生成鉬藍，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)液進行比色，可求得血磷的含量。試劑中加入聚山梨酯-80以抑制蛋白質(zhì)干擾。,【操作步驟】 測定管（U）標(biāo)準(zhǔn)管（S）空白管（B）去離子水（ml） --

14、 -- 0.1磷標(biāo)準(zhǔn)液（ml） -- 0.1 --血清 0.1 -- -- 顯色液（ml） 4.0 4.0 4.0,,,,混勻，37恒溫10分鐘，650nm波長，以空白管調(diào)零

15、，測定各管吸光度。,【計算】樣品磷含量（mmol/L）= ×1.29【參考值】成人0.97 ～ 1.62 mmol/L；兒童1.45 ～ 2.10 mmol/L【臨床意義】 1. 低磷血癥見于 ①攝入不足和吸收減少：饑餓或惡病質(zhì)、吸收不良綜合征、嘔吐、腹瀉、長期應(yīng)用含鋁的制劑等；②磷轉(zhuǎn)移入細(xì)胞內(nèi)：靜脈注射葡萄糖、胰島素及堿中毒、妊娠等；③丟失過多：血液透析、腎小管酸中毒

16、、急性痛風(fēng)等；④其他：如酒精中毒、糖尿病酮癥酸中毒、維生素D缺乏癥等。 2. 高磷血癥見于 甲狀旁腺功能減退癥、維生素D過多癥、Addison病、肢端肥大癥、多發(fā)性骨髓瘤等。,,體重約見5%的無機鹽主要有Ca、Mg、K、Na、P和Cl，這六種無機元素約占體內(nèi)無機鹽總量的60%~80%，主要存在于體液。無機離子的測定方法主要有火焰光度法、化學(xué)測定法、離子選擇電極法、代謝物酶試劑法等。其中離子選擇電極法標(biāo)本用量少（100μl全血