1、核酸和核仁組織區(qū)的組織化學(xué)核酸和核仁組織區(qū)的組織化學(xué)核酸的分布與組成成分核酸的分布與組成成分核酸的分布核酸的分布:細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核染色質(zhì)染色質(zhì)核仁核仁核酸核酸多核苷酸多核苷酸單核苷酸單核苷酸┌磷酸磷酸┌戊糖：核糖或脫氧核糖戊糖：核糖或脫氧核糖└核苷核苷└堿基：堿基：A，T，C，G，U核酸的種類與染色應(yīng)用核酸的種類與染色應(yīng)用RNA：胞質(zhì)及核內(nèi)：胞質(zhì)及核內(nèi)戊糖：核糖戊糖：核糖腺嘌呤（腺嘌呤（A），鳥嘌呤（，鳥嘌呤（G），胞嘧啶（，胞

2、嘧啶（C），尿嘧啶（，尿嘧啶（U）DNA：核內(nèi)：核內(nèi)戊糖：脫氧核糖戊糖：脫氧核糖腺嘌呤（腺嘌呤（A），鳥嘌呤（，鳥嘌呤（G），胞嘧啶（，胞嘧啶（C），胸腺嘧啶（胸腺嘧啶（T）核酸的種類與染色應(yīng)用核酸的種類與染色應(yīng)用核酸染色應(yīng)用核酸染色應(yīng)用免疫性疾病的診斷與研究免疫性疾病的診斷與研究免疫缺損免疫缺損AID過敏性反應(yīng)過敏性反應(yīng)腫瘤的診斷與研究腫瘤的診斷與研究淋巴瘤淋巴瘤反應(yīng)性病變反應(yīng)性病變瘤樣病變瘤樣病變核酸的染色方法核酸的染色方法1，F(xiàn)e

3、ulgen法2，甲基綠，甲基綠派洛寧法派洛寧法FeulgenRossenbeck法原理：原理：脫氧核糖核酸脫氧核糖核酸→→→→脫氧戊糖與堿基斷開，戊糖端形成醛基（脫氧戊糖與堿基斷開，戊糖端形成醛基（CHOCHO）與）與Schiff試劑（無試劑（無色）反應(yīng)色）反應(yīng)→→→→紫紅色（紫紅色（DNA部位）部位）PAS法:用過碘酸強(qiáng)氧化劑使六碳糖中的用過碘酸強(qiáng)氧化劑使六碳糖中的12乙二醇基（乙二醇基（—CHOHCHOH—）變成二醛基（）變成二醛基

4、（—CHO）然后與）然后與Schiff試劑反應(yīng)，形成紫紅色的化合物，在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)紫紅色試劑反應(yīng)，形成紫紅色的化合物，在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)紫紅色陽性反應(yīng)。陽性反應(yīng)。原理原理Schiff試劑中的酸濃度對兩個反應(yīng)的效果不同試劑中的酸濃度對兩個反應(yīng)的效果不同甲基綠甲基綠—派洛寧為堿性染料，它分別能與細(xì)胞內(nèi)的派洛寧為堿性染料，它分別能與細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA結(jié)合呈現(xiàn)不同顏色。甲基綠結(jié)合呈現(xiàn)不同顏色。甲基綠與派洛寧作為混合染料與派洛

5、寧作為混合染料甲基綠與染色質(zhì)中甲基綠與染色質(zhì)中DNA選擇性結(jié)合顯示綠色或藍(lán)色；選擇性結(jié)合顯示綠色或藍(lán)色；派洛寧與核仁、細(xì)胞質(zhì)中的派洛寧與核仁、細(xì)胞質(zhì)中的RNA選擇性結(jié)合顯示紅色選擇性結(jié)合顯示紅色甲基綠甲基綠派洛寧染色機(jī)制派洛寧染色機(jī)制電離作用電離作用電離后甲基綠在五價氮處產(chǎn)生二個正電荷，堿性較強(qiáng)，與細(xì)胞核結(jié)合，派洛寧電離后僅產(chǎn)電離后甲基綠在五價氮處產(chǎn)生二個正電荷，堿性較強(qiáng)，與細(xì)胞核結(jié)合，派洛寧電離后僅產(chǎn)生一個正電荷較弱與胞質(zhì)結(jié)合生一個正

6、電荷較弱與胞質(zhì)結(jié)合聚合作用聚合作用甲基綠與高聚合的甲基綠與高聚合的DNA結(jié)合，派洛寧與聚合低的結(jié)合，派洛寧與聚合低的RNA結(jié)合結(jié)合甲基綠甲基綠派洛寧法派洛寧法methylgreenpyronin染色步驟：染色步驟：1切片脫蠟如常，水洗切片脫蠟如常，水洗202M醋酸緩沖液稍洗醋酸緩沖液稍洗3甲基綠派洛寧液染色甲基綠派洛寧液染色1—2小時小時4傾去染液，用濾紙吸干切片上多余水分傾去染液，用濾紙吸干切片上多余水分5用正丁醇迅速分化用正丁醇迅速

7、分化10—20秒6經(jīng)丙酮迅速脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。經(jīng)丙酮迅速脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。結(jié)果：結(jié)果：DNA呈綠色，呈綠色，RNA呈紅色。呈紅色。甲基綠甲基綠派洛寧法派洛寧法methylgreenpyronin2%甲基綠儲存液：甲基綠儲存液：甲基綠甲基綠2g，ddH2O100ml2%派洛寧儲存液：派洛寧儲存液：派洛寧派洛寧2g，ddH2O100ml甲基綠用氯仿抽提甲基綠用氯仿抽提56次分液漏斗，加等量氯仿分液漏斗，加等量氯仿

8、充分搖蕩數(shù)分鐘后靜置充分搖蕩數(shù)分鐘后靜置液體分層，放掉分液漏斗中下層的紫色氯仿液體分層，放掉分液漏斗中下層的紫色氯仿直至氯仿洗不下紫色為止直至氯仿洗不下紫色為止派洛寧用氯仿抽提派洛寧用氯仿抽提56次同上用氯仿抽提數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止同上用氯仿抽提數(shù)次，待氯仿不顯紅色為止工作液：工作液：2%甲基綠儲存液（抽提后）甲基綠儲存液（抽提后）9ml2%派洛寧儲存液派洛寧儲存液4ml用0.2M醋酸鹽緩沖液（醋酸鹽緩沖液（pH4.8）調(diào)PH到4.