1、實驗方案一.【實驗題目】：土壤中細(xì)菌的分離純化實驗二.【實驗設(shè)計思想】：細(xì)菌是具有很高實用價值的一類微生物世界各國對其研究與資源開發(fā)極為重視.目前國內(nèi)有關(guān)細(xì)菌的區(qū)系調(diào)查及資源開發(fā)雖然有一些報道但對不同作物根際細(xì)菌的研究很少.甘肅天水麥積山海拔1742m屬黃土高原潮濕區(qū)植物生長土壤區(qū)有機質(zhì)含量豐富本次實驗將以該地區(qū)的落葉松、馬尾松、白巖松、野豌豆等作物生長地區(qū)的土壤為材料分離鑒定其中的細(xì)菌探討不同作物根際土壤中細(xì)菌分布數(shù)量及種類的差異并且

2、分析每一種菌種在植物生長過程中所起的作用，最后以此為依據(jù)來推斷麥積山大片地區(qū)內(nèi)土壤中微生物的分布豐富情況和它們對植物生長作出的巨大貢獻(xiàn).三.【實驗?zāi)康摹浚?.學(xué)會培養(yǎng)基最基本的制備方法。2.學(xué)會最基本的微生物滅菌、接種等基本操作過程。2.掌握最基本的分離、純化微生物的一系列操作操作。四.【試驗方法】：取天水麥積山不同植物根部的土壤作為土樣，通過對其土壤中微生物的一系列培養(yǎng)、分離、篩選最終分離出細(xì)菌得菌株，并稀釋平板菌落計數(shù)法進(jìn)行數(shù)量測定

3、四實驗原理:1.菌種來源：由于各種細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)需求不同，在不同地方采樣對選取所要的細(xì)菌含量和其它雜菌含量的多少直接有關(guān)，所以選擇微生物含量有可能豐富的土壤（天水麥積山植物根區(qū)）中采樣。2.培養(yǎng)基的選?。簽榱耸顾募?xì)菌能很好的生長，其它微生物生長受到一定的抑制，要用選擇培養(yǎng)基。還要把細(xì)菌與其他微生物相區(qū)別，還要用鑒別培養(yǎng)基。為了達(dá)到既是選擇培養(yǎng)基又是鑒別培養(yǎng)基，選取牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。3.培養(yǎng)及分離純化：通過涂布培養(yǎng)法、平板劃線法等方

4、法達(dá)到分離純化的目的。（4）調(diào)節(jié)PH值：初配好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液是微酸性的，故需用1molLNaOH調(diào)PH至7.27.4。為避免調(diào)解時過堿，應(yīng)緩慢加入NaOH液，即要邊滴加NaOH邊攪勻培養(yǎng)液，然后用PH試紙側(cè)其酸堿度值。檢測培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加1molLNaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達(dá)到所需pH范圍。若偏堿，則用1molLHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影

5、響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度.（5）.過濾:液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基此步可省略(6)分裝:披實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。分裝時可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積內(nèi)一半為宜。半固體培養(yǎng)基以試管高度的14為宜滅菌后垂直待凝。(7).加棉塞試管口和三角瓶口塞上

6、用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞，棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利透氣的作用。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有些微生物需要更好的透氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時也可用試管帽或塑料蓋代替棉塞。(8)包扎:加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包—層牛皮紙。然后用記號筆注明培