1、從我國(guó)東海近海污泥中分離篩選出一株高效降解烷烴的細(xì)菌,經(jīng)形態(tài)、生理生化特性及其16S rDNA序列分析,將此菌株初步鑒定為食堿菌屬(Alcanivorax sp.),命名為285。菌株285為革蘭氏陰性,球形,能產(chǎn)生物表面活性劑,不能利用葡萄糖、蔗糖等碳源,以酵母粉為唯一氮源時(shí)生長(zhǎng)較好。菌株285能夠在96h內(nèi)完全降解500 mg/L正十八烷,降解正十八烷的最適溫度是30～37℃,最適pH值為6.0～7.0,最適NaCl濃度為2％～9％

2、。菌株285能夠降解原油中C13～C30的正構(gòu)烷烴及姥鮫烷、植烷等支鏈烷烴,在人工海水中降解原油中烷烴的最適溫度是30℃,最適接種量為1％,通氣量越大越好,補(bǔ)加2 g/L NH4NO3和0.25 g/L酵母粉可以明顯地提高原油中烷烴的降解率。由于其較高的烷烴降解率和較廣的烷烴降解譜,菌株285可以應(yīng)用于海洋石油污染的生物修復(fù)。
　　 從山東東營(yíng)勝利油田油井下的油水混合物中分離篩選出一株嗜熱烷烴降解菌株,經(jīng)形態(tài)、生理生化特性及其1

3、6S rDNA序列分析,將其初步鑒定為土芽孢桿菌屬(Geobacillus sp.),命名為MH-1。菌株MH-1為革蘭氏陽(yáng)性,長(zhǎng)桿狀,能產(chǎn)芽孢。菌株MH-1在培養(yǎng)96h后對(duì)正十六烷的降解率達(dá)92％以上,降解的最適溫度是70℃,最適pH值為6.0,能夠在6天內(nèi)降解原油中的大部分中鏈烷烴及部分長(zhǎng)鏈烷烴。
　　 首先從菌株285中克隆出alkB基因的保守片段,在此基礎(chǔ)上通過(guò)SEFA-PCR方法成功克隆出alkB全長(zhǎng)基因及其上、下游序

4、列。氨基酸序列分析表明,該基因與具有完整ORF的Marinobacter sp.ELB17的putitave AlkB具有最高的同源性(65％),與經(jīng)過(guò)功能驗(yàn)證的Alcanivorax borkumensis SK2的AlkB1的同源性為41.9％,存在四個(gè)含His的保守基序,分別為Hist-1、Hist-2、Hist-3和HYG-motif。進(jìn)一步將該基因在P.fluorescens KOB2△1進(jìn)行異源表達(dá),恢復(fù)了P.fluores

5、cens KOB2Δ1降解烷烴的功能,表明該基因就是烷烴羥化酶基因(GenBank登錄號(hào)為No.FJ905614),能夠氧化C14和C16烷。通過(guò)RT-PCR方法證明該alkB基因能夠在指數(shù)生長(zhǎng)期被正十八烷誘導(dǎo)表達(dá)。在alkB基因的上、下游序列中分別存在一個(gè)與AraC家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白有關(guān)序列的同源性達(dá)58％的ORF和一個(gè)與Shewanella sp.W3-18-1菌株的siderophore-interactingprotein的氨基酸

6、序列的同源性達(dá)45％的ORF。
　　 從菌株2B5中成功克隆出細(xì)胞色素P450基因及其基因簇,該基因簇包含5個(gè)完整的ORF,它們分別與Limnobacter sp.MED105菌株的transcriptional regulator和Alcanivorax dieselolei B-5T菌株的putative ferrodoxin、cytochrome P450 alkanehydroxylase、putative alcoho

7、l dehydrogenas、putative FAD-dependent oxidoreductasefamily protein的氨基酸序列的同源性達(dá)73％、98％、99％、99％和99％,將此5個(gè)ORF分別命名為transcriptional regulator、fdx、P450、alkJ和fde。通過(guò)在E.coli BL21(DE3)中構(gòu)建多順反子結(jié)構(gòu)fdx、P450和fdr基因的共表達(dá)系統(tǒng),檢測(cè)P450基因的功能活性,但沒有顯

8、示出活性。
　　 研究了Geobacillus sp.MH-1菌株中的alkB基因及其基因簇。采用普通PCR方法從Geobacillus sp.MH-1中獲得alkB基因的同源物,alkB-geol、alkB-ge04和alkB-ge06,它們分別與Rhodococcus sp.Q15中alkB4、alkB3和alkB2基因高度同源。進(jìn)一步采用SEFA-PCR的方法,獲得alkB-ge06基因簇的完整序列(GenBank登錄號(hào)為

9、No.FJ977899),該基因簇包含putative transporter、alkB-ge06、rubA3、rubA4和putativeregulatory protein。核苷酸和氨基酸序列分析表明,alkB-geo6基因簇的核苷酸序列與Rhodococcus sp.Q15和Rhodococcus sp.NRRL-16531的alkB2的基因簇的序列同源性高達(dá)98％。在菌株MH-1的AlkB-geo6中同樣發(fā)現(xiàn)了四個(gè)含His的保守