1、越來(lái)越嚴(yán)重的富營(yíng)養(yǎng)化，尤其是亞硝酸鹽污染已成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)常見(jiàn)且難以預(yù)防的危害因素之一。微生物的反硝化脫氮法是解決上述問(wèn)題的有效手段之一。 本課題通過(guò)廣泛取樣，分離出202株反硝化細(xì)菌。用滅菌的LB培養(yǎng)基調(diào)節(jié)控制水樣的CODMn約為25mg/L，以此水樣為基礎(chǔ)，通過(guò)定量測(cè)定菌株反硝化能力的方法，同時(shí)結(jié)合實(shí)驗(yàn)室保存的反硝化芽孢桿菌DNF409的反硝化特點(diǎn)，篩選出一株同等條件下不會(huì)嚴(yán)重積累亞硝酸鹽的菌株A13。通過(guò)生理生化試驗(yàn)和16S

2、rDNA序列分析，菌株A13鑒定為地衣芽孢桿菌。 研究表明：在影響反硝化效率的因素中，CODMn是關(guān)鍵因素。在CODMn低于10.5mg/L時(shí)，兩株菌A13和DNF409都只能進(jìn)行微弱的反硝化作用。添加碳源后能顯著提高反硝化作用，其中以添加乙醇效果最明顯，向水樣中添加0.2％(v/v)的乙醇后，反硝化脫氮率達(dá)99％以上。在pH為6.0-8.0的范圍內(nèi)，反硝化效率沒(méi)有明顯的差別，即在自然水體中，pH不會(huì)成為反硝化脫氮的限制因素。在

3、溫度超過(guò)20℃時(shí)，反硝化作用能進(jìn)行得比較完全。投菌量對(duì)反硝化作用也有明顯的影響，在CODMn為19mg/L時(shí)，一次投菌量需要達(dá)到107cfu/mL才會(huì)有明顯效果。由于反硝化作用的進(jìn)行，兩株菌對(duì)降低水樣的CODMn也能起到一定的作用。 研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，不滅菌水樣中，兩株菌的反硝化效率明顯優(yōu)于滅菌水樣；相同CODMn的野芷湖水樣和蒸餾水樣，前者的反硝化作用明顯優(yōu)于后者。分析可能是微生物菌群的協(xié)同反硝化作用。因此將兩株菌協(xié)同聯(lián)合應(yīng)用。

4、為了確定它們的聯(lián)合應(yīng)用方式，分別跟蹤檢測(cè)了它們各自的反硝化特點(diǎn)。研究結(jié)果顯示：在前12h內(nèi)，DNF409降解硝酸鹽的速度明顯優(yōu)于A13，但同時(shí)迅速積累大量的亞硝酸鹽；在前24h內(nèi)，它們都能將硝酸鹽降解到很低的水平，但DNF409積累的亞硝酸鹽比A13嚴(yán)重，隨著時(shí)間的進(jìn)一步延長(zhǎng)，達(dá)到156h時(shí)，亞硝酸鹽均會(huì)上升。根據(jù)兩株菌的不同的作用特點(diǎn)及協(xié)同作用原理，通過(guò)試驗(yàn)建立了組合應(yīng)用模式，首先使用DNF4、09菌株，24h后再向水樣中投加A13，