1、彗星試驗(yàn)(Comet assay)又稱單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)(Single Cell GelElectroDhoresis)，是一種快速、靈敏的檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞DNA斷裂的新技術(shù)，由于其具備快速、靈敏、需樣品量少等優(yōu)越性，應(yīng)用前景十分廣泛。為了在本實(shí)驗(yàn)室建立彗星試驗(yàn)方法，利用該方法檢測(cè)烷基酚類化合物對(duì)海洋生物血淋巴細(xì)胞的DNA損傷，并且擴(kuò)展該方法在海洋生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用，進(jìn)行了本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。 本文研究了壬基酚(nonylphenol，

2、NP)、丁基酚(butylphenol，BP)、辛基酚(octylphenol，OP)和雙酚A(bisphenol A，BPA)等酚類化合物對(duì)海洋貝類血淋巴細(xì)胞DNA的損傷，共設(shè)5個(gè)試驗(yàn)劑量，分別為0、0.025、0.10、0.25、1.00mg／L，試驗(yàn)進(jìn)行24h和48h后，分別采集血淋巴細(xì)胞進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳試驗(yàn)。 本研究包括以下幾部分：首先采用壬基酚對(duì)海灣扇貝(Argopectenirradians)進(jìn)行了活體和離體的

3、染毒實(shí)驗(yàn)，其后對(duì)牡蠣(Crassostrea gigas)、文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus)進(jìn)行了體內(nèi)染毒實(shí)驗(yàn)，通過對(duì)三種貝類染毒后血淋巴細(xì)胞的彗星試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了遺傳毒性分析。結(jié)果表明：不論活體還是離體試驗(yàn)，從血淋巴細(xì)胞的彗星圖和試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析結(jié)果可以看出，隨著壬基酚溶液濃度的增大，彗星尾長(zhǎng)和細(xì)胞遷移率均相應(yīng)增加，說明壬基酚溶液劑量越大，對(duì)貝類血淋巴細(xì)胞DNA的損傷越嚴(yán)重，且壬基酚濃度與貝類血淋巴細(xì)胞DNA損傷

4、程度之間存在著明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果還表明NP對(duì)貝類的遺傳毒性風(fēng)險(xiǎn)濃度為0.025mg/L，高于此濃度將會(huì)對(duì)貝類的DNA結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性造成不同程度的破壞而致突變、致畸變和致癌變，同時(shí)由于人類的食物攝取可能會(huì)影響到人類的健康。數(shù)據(jù)分析結(jié)果同時(shí)表明，在相同濃度的壬基酚處理組中，扇貝、牡蠣和文哈血淋巴細(xì)胞的破壞率和遷移長(zhǎng)度存在種間差異，這可能是由于這三種貝類對(duì)IP的免疫程度不同所致，但關(guān)于海洋生物對(duì)外界干擾因素存在不同免疫力的具體機(jī)制以及它們

5、之間的差別，目前國(guó)內(nèi)外的研究還不多見，具體研究還有待進(jìn)一步的開展。 本文第二部分研究了不同的酚類化合物(丁基酚、辛基酚和雙酚A)對(duì)海灣扇貝血淋巴細(xì)胞DNA的損傷狀況，彗星試驗(yàn)結(jié)果表明：隨著丁基酚、辛基酚和雙酚A溶液濃度的增高，彗星尾長(zhǎng)和遷移率明顯增加，說明丁基酚、辛基酚和雙酚A的劑量越大，對(duì)貝類血淋巴細(xì)胞DNA的損傷越嚴(yán)重，且染毒濃度與貝類血淋巴細(xì)胞DNA損傷之間存在著明顯的劑量一效應(yīng)關(guān)系。四種酚類化合物染毒24h和48

6、h后，對(duì)扇貝血淋巴細(xì)胞DNA遷移長(zhǎng)度的影響能力均呈現(xiàn)如下規(guī)律：NP

7、場(chǎng)：紅島養(yǎng)殖場(chǎng)(重污染區(qū))和沙子口養(yǎng)殖場(chǎng)(輕污染區(qū))，分別采集兩個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)中的海灣扇貝，進(jìn)行彗星試驗(yàn)分析，對(duì)扇貝的DNA損傷進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沙子口養(yǎng)殖場(chǎng)的扇貝血淋巴細(xì)胞沒有出現(xiàn)DNA遷移，因此基本確定沙子口養(yǎng)殖場(chǎng)的污染程度較輕，DNA破壞率為零。而紅島養(yǎng)殖場(chǎng)的扇貝，其血淋巴細(xì)胞中有17％發(fā)生了DNA遷移，平均遷移長(zhǎng)度為2.984μm。同時(shí)對(duì)這兩個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)海水中的壬基酚濃度進(jìn)行了化學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)紅島養(yǎng)殖場(chǎng)海水中的壬基酚濃度為268.67ng