1、分類號： Q 7 8密 級：學位類別： 科學學位囹 專業(yè)學位口O學校代碼：10 062學 號：2 0 1 1 6 0 2 0 2 1學科門類：理學又蚌簣科袁母 T l A N J l N M E D I C A l - U 麓l V 囂l 噶1 1 愕碩士學位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目：T A T - N L S —N k x 6 ．2 融合蛋白功能的初步研究T IT L E

2、 P r i m a r y r e s e a r c ho f T A T - N L S —N k x 6 ．2f u s i o np r o t e i n一級學科：生物學二級學科：生物化學與分子生物學論文作者：孫少飛指導教師：郭剛導師組成員：張瑞助理研究員王寶利研究員天津醫(yī)科大學研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要由同源盒基因N k x 6 ．2 編碼產(chǎn)生的同源結構域N k x 6 ．2 作為一種反式作用因

3、子，在少突膠質(zhì)細胞特化、成熟及髓鞘形成過程中和中樞神經(jīng)系統(tǒng)( c e n t r a ln e r v o u s s y s t e m ，C N S ) 胚胎期神經(jīng)母細胞特化生，都發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本實驗室在前期研究過程中發(fā)現(xiàn)，腦發(fā)育時期甲狀腺激素( t h y r o i dh o r m o n e ，T H )不足會造成C N S 內(nèi)重要神經(jīng)細胞異常，同時伴隨N k x 6 ．2 低表達。但是，由于T H 不足導致的腦發(fā)育遲

4、滯的病理過程中，轉(zhuǎn)錄因子N k x 6 ．2 參與的具體機制尚不明確。我們希望通過給予甲狀腺功能減低模型添加外源性N k x 6 ．2 的方法，可以有助于解決或部分解決這一問題。本課題組前期工作將N k x 6 ．2 與核定位信號( n u c l e a rl o c a t i o n s e q u e n c e ，N L S ) 、T A T 蛋白轉(zhuǎn)導域( p r o t e i n t r a n s d u c t i o

5、 nd o m a i n ，P T D ) 一起構建重組表達質(zhì)粒p E T - 2 8 a ．T N - N K x 6 ．2 。本文將該重組表達質(zhì)粒p E T - 2 8 a ．T N ．N K x 6 ．2 轉(zhuǎn)染神經(jīng)細胞并表達，細胞熒光免疫確定其表達產(chǎn)物可以進入神經(jīng)細胞細胞核。之后對實驗室前期獲得的純化T A T - N L S - N k x 6 ．2 融合蛋白，進行熒光染料C y 7 ．N ．羥基琥珀酰亞胺酯( C y 7 ．

6、N - h y d r o x y s u c c i n i m i d e e s t e r ，C y 7N H S ) 的標記。隨后向小鼠尾靜脈注射C y 7 ．T N ．N k x 6 ．2 ，應用活體熒光成像系統(tǒng)監(jiān)測融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 在小鼠腦部的動態(tài)分布，結果證明該融合蛋白能夠通過血腦屏障( b l o o d ．b r a i nb a r r i e r ，B B B ) 進而到達腦組織；同時通過免

7、疫熒光組化實驗表明該融合蛋白可以內(nèi)化進入神經(jīng)細胞胞漿、胞核。最后向神經(jīng)干細胞中加入融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 繼續(xù)培養(yǎng)，細胞熒光免疫反應觀察不同培養(yǎng)不同時間段神經(jīng)細胞分化情況，發(fā)現(xiàn)融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 可以促進神經(jīng)干細胞的分化，尤其是促進神經(jīng)干細胞向少突膠質(zhì)細胞特化，促進神經(jīng)干細胞的成熟。關鍵詞：同源盒基因N k x 6 ．2 p E T - 2 8 a 質(zhì)粒w 正．N L s - N l ( x 6 ．2