1、中南大學碩士學位論文缺氧誘導因子1α基因克隆及HIF-1α-pcDNA3.1表達研究姓名：劉劍申請學位級別：碩士專業(yè)：胸心外科指導教師：楊進福20070501碩士學位論文 中文摘要證實。方法：抽提大鼠心肌細胞m R N A ，以m R N A 為模版，逆轉錄得到c D N A ，P C R 擴增H I F ．1 a 目的基因，連接到p G E M ．T 載體中，酶切，測序證實，雙酶切將H I F —l a 轉至p c D N A 3 ．

2、1 中。結果：瓊脂糖凝膠電泳結果顯示R T ．P C R 擴增出的特異片段約2 4 8 0 b p ，基因測序結果與G e n B a n k 報道的完全一致，結果成功構建了H I F ．1 a - p c D N A 3 ．1 真核表達載體。結論：成功將H I F ．1 a 基因構建到p c D N A 3 ．1 真核表達載體中，經測序檢測無堿基改變。第二部分：H I F ．1 a - p c D N A 3 ．1 表達載體轉染H e

3、 l a 細胞研究目的：將構建的H I F —l a ．p c D N A 3 ．1 真核表達載體，在宮頸癌細胞( H e l a ) q ，進行表達并檢測其蛋白表達。方法：采用陽離子脂質體法將載體轉入H e l a 細胞，觀察H I F - 1 a m R N A 的表達情況，然后分別用熒光染色和W e s t e r n B l o t 等方法檢測證實轉染的有效性。結果；質粒H I F ．1 小p c D N A 3 ．1 轉染H