1、山東大學碩士學位論文適冷海洋細菌Pseudoalteromonas sp.MB-1內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達姓名：游銀偉申請學位級別：碩士專業(yè)：微生物學指導教師：汪天虹20040401適冷海洋細菌P s e u d o a l t e r o m o n a ss p ．M B —l 內(nèi)切葡聚糖酶基因的克隆和表達摘要海洋適冷微生物生活在自然界的低溫環(huán)境中( O ℃或接近0 ℃) ，歷經(jīng)長期的環(huán)境適應( 高壓、高鹽、低溫、低營養(yǎng)、低光照

2、等) ，具有特殊的遺傳和代謝特性。自海洋微生物中分離得到的酶等生物活性物質(zhì)，結構新穎，功能獨特，是陸地生物所不具有的，其中占主導地位的海洋細菌所產(chǎn)的生物活性物質(zhì)種類最為豐富。長期生活在低溫環(huán)境中的海洋微生物所產(chǎn)的酶大多數(shù)具有低溫催化和對熱不穩(wěn)定的特征，這些酶的最適反應溫度在3 0 。C 左右并且在低溫下( 0 ℃一4 “ C ) 仍保持高比例的活性，因此稱為低溫酶。纖維素酶在釀酒、飼料、食品加工工業(yè)中有著廣泛的用途，研究開發(fā)適冷海洋細菌

3、的低溫纖維素酶，既有理論意義，也有一定的實際應用價值。本實驗室從黃海的深海海底泥樣中篩選出一株產(chǎn)纖維素酶的革蘭氏陰性的桿菌M B 一1 ，它的最適生長溫度為2 0 。C ，最高生長溫度為4 0 ℃，在O “ C 也能生長，因此是典型的適冷菌。該菌所產(chǎn)的內(nèi)切B 一1 ，4 - 葡聚糖酶的最適反應溫度為3 5 。C ，在1 0 “ ( 2 下仍有較高的酶活，屬于適冷酶，最適反應p H 值為6 ．0 ，屬于酸性酶。細菌的1 6 Sr D N

4、A 序列具有兩端保守，中間可變的特點，根據(jù)可變區(qū)可對其進行分類鑒定，利用1 6 Sr D N A 序列鑒定細菌已經(jīng)成為一個廣泛而有效的方法。本文克隆和分析了海洋細菌M B 一1 的1 6 S r D N A 序列，將其鑒定為交替假單胞菌( P s o u d o a ] t e r o m o H 8 s ) ，命名為P s e u d o a ] t e r o m o n a ss p ．M B —l ，同時對P s e u d o

5、 a ] t e F o M o n s ss p ．M B 一1 的1 6 Sr D N A序列進行了系統(tǒng)發(fā)育樹分析。交替假單胞菌屬是1 9 9 5 年根據(jù)1 6 Sr D N A 序列的特點從交替單胞菌屬( A ] t e z ' 。m o n a s ) 中分離出來的一個屬，目前對它的研究還不多，因此，對P s e u d o a ] t e r o m o n a ss o ．M B 一1 做進一步的研究是很有意義的。采