1、乙型肝炎是一種常見(jiàn)的嚴(yán)重肝臟疾病，由乙型肝炎病毒（HBV）感染引起。據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界上超過(guò)2.4億人為慢性乙型肝炎患者，導(dǎo)致每年約78萬(wàn)人死于肝臟類疾病，如肝硬化、肝癌或其他相關(guān)疾病。目前，用于治療慢性乙型肝炎的藥物主要有兩類：干擾素類免疫調(diào)節(jié)制劑和核苷（酸）類病毒聚合酶抑制劑。然而，干擾素治療僅對(duì)60％的患者有效，并且副作用出現(xiàn)頻繁，注射條件受限。與干擾素相比，核苷（酸）類似物有以下優(yōu)勢(shì)：口服生物利用度高、副作用少以及臨床效益較高，但長(zhǎng)時(shí)

2、間使用核苷（酸）類藥物會(huì)增加耐藥性和副作用發(fā)生的幾率，導(dǎo)致治療失敗。盡管如此，核苷（酸）類抗病毒藥物仍是目前最有發(fā)展前景的慢性乙型肝炎治療藥物。
　　本論文在我們課題組前期研究工作的基礎(chǔ)上，從以下兩個(gè)方面對(duì)核苷類似物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾及抗HBV活性研究：
　　(1)為了解決核苷類似物FNC（2'-脫氧-2'-β-氟-4'-疊氮胞苷）的抗HBV毒性問(wèn)題，我們根據(jù)FNC的構(gòu)效關(guān)系設(shè)計(jì)并合成了一系列4-N-烷基取代的氟代核苷類似物2-2

3、0?2-30。我們以合成FNC的重要中間體2-17為原料，經(jīng)過(guò)3步反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物，并對(duì)這些新型核苷類似物進(jìn)行了1H NMR、13C NMR及HRMS等結(jié)構(gòu)表征，并利用X單晶衍射對(duì)化合物2-25的結(jié)構(gòu)進(jìn)一步進(jìn)行確認(rèn)。另外，經(jīng)HPLC分析，目標(biāo)化合物的純度均在95%以上。
　　通過(guò)對(duì)新型核苷類似物2-20?2-30在細(xì)胞株HepG2.2.15中的毒性測(cè)試及在細(xì)胞株HepG2.CW中的活性測(cè)試篩選出環(huán)丙胺衍生物2-25，并對(duì)其進(jìn)一步進(jìn)

4、行體內(nèi)抗 HBV活性研究。急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在昆明小鼠中，化合物2-25表現(xiàn)出明顯的毒性改善作用，化合物2-25的口服劑量可達(dá)到3 g/kg。通過(guò)昆明小鼠的白細(xì)胞毒性及誘變效應(yīng)評(píng)估可知，化合物2-25對(duì)白細(xì)胞無(wú)顯著毒性，并且，在單次給藥80 mg/kg或連續(xù)5天每天給藥20 mg/kg時(shí)，昆明小鼠幾乎無(wú)誘導(dǎo)效應(yīng)。在DHBV感染的鴨模型中，連續(xù)10天每天給藥1 mg/kg后，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)化合物2-25對(duì)鴨血清和肝臟中DHBV DNA抑制率

5、分別為74.2%和82.1%，并且停藥3天后僅發(fā)現(xiàn)有輕微反彈現(xiàn)象。通過(guò)對(duì)SD大鼠進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)化合物2-25生物利用度（F）不高，其F值為18.7±7.5%。另外，我們還對(duì)化合物2-25在生物體內(nèi)的活性分子2-25的三磷酸分子（2-25-TP）與HBV聚合酶的相互作用分子模型進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)2-25-TP與活性位置結(jié)合完好并在氫鍵和鹽橋的相互作用下能穩(wěn)定存在，與前面活性測(cè)試結(jié)果吻合。分子模型的建立有利于指導(dǎo)我們?cè)O(shè)計(jì)具有抗HBV

6、活性的新型化合物。
　?。?）為了減少核苷類藥物的耐藥性和副作用發(fā)生的幾率，提高聯(lián)苯雙酯的生物利用度，在本題組抗病毒藥物核苷類似物及具有保肝活性的聯(lián)苯類化合物的研究基礎(chǔ)上，采用“Codrug”新藥研發(fā)策略，合成了一系列新型核苷-聯(lián)苯雙酯化合物3-23?3-50，并對(duì)這些新型核苷類似物進(jìn)行了1H NMR、13C NMR、HRMS或IR等結(jié)構(gòu)表征。
　　通過(guò)對(duì)化合物3-23?3-50在細(xì)胞株HepG2.2.15中的毒性及初步活性

7、測(cè)試實(shí)驗(yàn)，篩選出3個(gè)低毒、高活性的化合物（3-29、3-40及3-43），它們的CC50值分別為965.4μM、1546.5μM和436.16μM。我們對(duì)這3個(gè)化合物分別進(jìn)行進(jìn)一步體內(nèi)外抗HBV活性研究：對(duì)細(xì)胞株HepG2.2.15上清液中HBeAg及HBsAg分泌的抑制作用；對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞內(nèi)外HBV DNA復(fù)制的抑制效應(yīng)；對(duì)DHBV感染的鴨模型療效評(píng)估（對(duì) DHBV DNA復(fù)制的抑制作用、血清及肝臟中 ALT及AST水平的

8、檢測(cè)、組織病理學(xué)分析）。結(jié)果顯示，與陽(yáng)性對(duì)照組3TC相比，3個(gè)化合物在低劑量情況下顯示出類似或者優(yōu)于3TC的抗 HBV活性，但化合物3-40及3-43在對(duì)鴨血清及肝組織內(nèi)的DHBV DNA復(fù)制的抑制作用評(píng)估中，停藥后DHBV DNA水平出現(xiàn)程度較大的反彈現(xiàn)象，而化合物3-29反彈程度較低。因此，我們接著對(duì)化合物3-29進(jìn)行有關(guān)肝保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)，在給藥5天后，通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，化合物3-29在劑量組為150或300 mg/kg/d時(shí)均能明顯降