1、六溴環(huán)十二烷((Hexabromocyclododecane，HBCD)屬于添加型含溴阻燃劑，已經(jīng)成為環(huán)境介質(zhì)和生物群中無(wú)處不在的污染物。HBCD具有持久性和蓄積性等特點(diǎn)，它在環(huán)境中能夠與其替代的溴代阻燃物多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)形成復(fù)合污染體系，二者一起作用對(duì)人類健康造成潛在的危害。處于腦發(fā)育期的兒童是HBCD及HBCD/PBDEs復(fù)合污染物暴露的高風(fēng)險(xiǎn)人群。現(xiàn)有的研究資料顯示HBCD與PBDEs均能夠?qū)Ξa(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用，如:對(duì)甲狀

2、腺激素產(chǎn)生干擾及對(duì)甲狀腺激素代謝過(guò)程產(chǎn)生潛在的影響。為了研究HBCD及HBCD/PBDEs復(fù)合污染物暴露對(duì)甲狀腺激素代謝過(guò)程的影響，本文根據(jù)腦發(fā)育期兒童為HBCD及其復(fù)合污染暴露的高風(fēng)險(xiǎn)人群的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)選擇新生3天的SD大鼠，依據(jù)真實(shí)環(huán)境暴露水平設(shè)計(jì)HBCD單一暴露劑量(10、50、100、300μg/kg)，及HBCD與等濃度商用多溴聯(lián)苯醚DE-71按2∶1比例復(fù)配制成的復(fù)合物暴露劑量(10、50、100、300μg/kg)。此外，分

3、別設(shè)置對(duì)照組。根據(jù)大鼠腦發(fā)育的特點(diǎn)，將暴露時(shí)間分為21天短期暴露，42天中期暴露和90天長(zhǎng)期暴露。通過(guò)對(duì)大鼠甲狀腺激素水平的變化，甲狀腺激素代謝酶（脫碘酶）的活性變化及脫碘酶的基因表達(dá)情況等指標(biāo)的測(cè)試，從生化指標(biāo)和基因水平揭示HBCD及HBCD/PBDEs復(fù)合污染物暴露對(duì)甲狀腺激素干擾的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示:
　　 1、利用125I-甲狀腺激素與抗血清放射免疫分析法測(cè)定血清中甲狀腺激素相關(guān)指標(biāo)的變化，包括:TT3、TT4、FT

4、3、FT3、TSH等。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:
　　 經(jīng)HBCD短期暴露21d，各暴露劑量組大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4濃度均顯著升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD暴露至42d，10μg/kg的染毒組FT3、FT4的濃度顯著升高(P＜0.05);而其他染毒組的TT3、TT4、FT3、FT4的濃度與21d暴露比均呈現(xiàn)回落的趨勢(shì)，與對(duì)照組相比，300μg/kg的染毒組大鼠血清中TT3顯著下降(P＜0.05);染毒組血

5、清中TSH的濃度呈現(xiàn)顯著降低(P＜0.05)。經(jīng)過(guò)HBCD暴露至90d，染毒組大鼠出現(xiàn)了血清中TT3、TT4、FT3、FT4的濃度均上升的趨勢(shì)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露至21天，各劑量組大鼠血清中TT4、FT3、FT4濃度出現(xiàn)升高的趨勢(shì)，TT3、TSH濃度下降。其中50ug/kg和300ug/kg劑量組大鼠血清中TT4、FT4濃度顯著性升高(P＜0.05)，100ug/kg劑量組TSH濃度顯著下降(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE

6、-71復(fù)合暴露至42d和90天，大鼠血清中TT4、TT3、FT4、FT3、TSH濃度均呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)。
　　 2、利用Chopra氏法測(cè)定甲狀腺激素代謝酶（脫碘酶）活性，包括:Ⅰ型脫碘酶(D1)和Ⅱ型脫碘酶(D2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:經(jīng)HBCD單一暴露21天，10、100、300ug/kg劑量組D1活性顯著性升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD暴露42天，所有暴露劑量組大鼠肝臟中Ⅰ型脫碘酶(D1)活力均呈現(xiàn)降低的現(xiàn)象，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

7、＞0.05)。90天，HBCD對(duì)大鼠肝臟組織D1活性的影響與暴露42天時(shí)的現(xiàn)象一致。經(jīng)HBCD/DE-71暴露21天后，300ug/kg劑量組D1活性出現(xiàn)顯著性增大的現(xiàn)象(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天，所有暴露劑量組大鼠肝臟D1活性同21天的現(xiàn)象一致，活性均增大，但42天活性的升高并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71長(zhǎng)期暴露后，各暴露劑量組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1)活性均下降。
　　 經(jīng)過(guò)H

8、BCD暴露21天，10、50、100ug/kg染毒組大鼠腦組織D2活性顯著性下降(P＜0.05)。經(jīng)暴露42天，所有暴露劑量組大鼠腦組織中D2活性均呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，其中50ug/kg和100ug/kg染毒組出現(xiàn)顯著性下降的趨勢(shì)(P＜0.05)。經(jīng)暴露90天，50、100ug/kg劑量組D2活性顯著性升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露21天后，所有的暴露劑量組大鼠腦組織D2活性均出現(xiàn)了明顯升高的趨勢(shì)，尤其10ug/kg劑量組

9、D2活性顯著性升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天，300ug/kg劑量組D2活性出現(xiàn)顯著性增大的現(xiàn)象(P＜0.05)。經(jīng)90天長(zhǎng)期暴露，所有染毒組D2活性全部呈現(xiàn)出顯著性升高的趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　 3、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Real-timePCR)定量測(cè)定甲狀腺激素代謝酶基因表達(dá)水平的變化，包括:Ⅰ型脫碘酶(D1)及Ⅱ型脫碘酶(D2)基因表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 經(jīng)HBCD暴露21

10、天，染毒組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1)mRNA表達(dá)水平隨劑量呈現(xiàn)先降低后增大的趨勢(shì)，但整體mRNA表達(dá)水平無(wú)顯著性差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。暴露至42天，300ug/kg染毒組D1mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P＜0.05)。經(jīng)HBCD長(zhǎng)期暴露后，10、50、100ug/kg劑量組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1)mRNA表達(dá)水平顯著性增大(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露21天，10～100ug/kg劑量組D1mRNA表達(dá)

11、水平顯著性升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天，100ug/kg劑量組D1mRNA表達(dá)水平顯著性升高(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露90天后，50、100、300ug/kg暴露劑量組大鼠D1mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P＜0.05)。
　　 經(jīng)HBCD暴露21天后，所有暴露染毒組中大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶(D2)mRNA表達(dá)水平均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)。經(jīng)HBCD暴露42天，50ug/kg染毒組大

12、鼠腦組織中D2mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P＜0.05)。經(jīng)HBCD長(zhǎng)期暴露，各暴露組大鼠腦組織D2mRNA表達(dá)水平開始呈現(xiàn)明顯升高的趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露21天，100ug/kg和300ug/kg暴露組大鼠D2mRNA表達(dá)水平顯著性增大(P＜0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露42天，與對(duì)照組相比，10～300ug/kg暴露劑量組的大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶(D2)基因表達(dá)水平出現(xiàn)升高的趨

13、勢(shì)但無(wú)明顯差異(P＞0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露90天后，10ug/kg和300ug/kg染毒組大鼠D2mRNA表達(dá)水平顯著性升高（P＜0.05）。
　　 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出以下結(jié)論:
　　 1、本實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)HBCD對(duì)甲狀腺激素具有促進(jìn)或激動(dòng)劑的效果，導(dǎo)致甲狀腺激素水平的升高，干擾了體內(nèi)甲狀腺激素的相對(duì)平衡狀態(tài)。而對(duì)于多溴聯(lián)苯醚而言，以往的研究通常顯示其對(duì)甲狀腺激素具有抑制的作用，常常導(dǎo)致甲狀腺激素水

14、平的下降。但本研究中HBCD與DE-71作為一復(fù)合污染體系作用時(shí)，甲狀腺激素水平并未出現(xiàn)下降，反而升高，但從21天來(lái)看，對(duì)甲狀腺激素的影響無(wú)顯著差異，對(duì)照HBCD單獨(dú)暴露的結(jié)果來(lái)看體現(xiàn)了PBDEs的抑制作用。此外，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明HBCD及HBCD/DE-71更易通過(guò)影響游離甲狀腺激素水平(FT3、FT4)對(duì)機(jī)體的生理過(guò)程產(chǎn)生影響。
　　 2、本研究中HBCD單獨(dú)進(jìn)行短期21d暴露時(shí)，Ⅰ型脫碘酶活性升高;經(jīng)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)暴露后，隨

15、著時(shí)間的推移，HBCD對(duì)Ⅰ型脫碘酶的活性無(wú)明顯影響。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合污染暴露后，發(fā)現(xiàn)短期暴露時(shí)高暴露劑量的兩種污染物聯(lián)合作用導(dǎo)致大鼠Ⅰ型脫碘酶活性明顯升高，長(zhǎng)期暴露時(shí)低暴露劑量組和高劑量組均明顯抑制了Ⅰ型脫碘酶的活性，與HBCD單獨(dú)作用時(shí)產(chǎn)生的毒性效果存在很大差異。經(jīng)HBCD短期單獨(dú)暴露后，低濃度的HBCD對(duì)大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶活性產(chǎn)生抑制作用。長(zhǎng)期暴露后，HBCD對(duì)Ⅱ型脫碘酶活性無(wú)影響，表明這種抑制作用是可逆轉(zhuǎn)的，可隨著時(shí)間

16、的推移逐漸消失。當(dāng)HBCD與DE-71兩種復(fù)合暴露后，不管是短期暴露還是長(zhǎng)期暴露，這一復(fù)合污染體系均使得D2活性明顯升高，尤其是90天長(zhǎng)期暴露時(shí)間內(nèi)D2活性表現(xiàn)更為明顯。上述結(jié)果均表明HBCD及HBCD/DE-71均能夠通過(guò)改變脫碘酶的活性來(lái)影響甲狀腺激素的代謝過(guò)程從而進(jìn)一步影響機(jī)體內(nèi)甲狀腺激素水平的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。
　　 3、研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)HBCD短期暴露后HBCD對(duì)Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平并未產(chǎn)生影響。而長(zhǎng)期暴露后，低濃度的HB

17、CD使Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平升高，但中期42d暴露后高濃度的HBCD對(duì)Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平具有抑制作用。HBCD/DE-71復(fù)合暴露研究發(fā)現(xiàn)，短期暴露后，HBCD/DE-71對(duì)D2基因表達(dá)水平有促進(jìn)作用;長(zhǎng)期暴露后則對(duì)其產(chǎn)生抑制作用。這表明HBCD與HBCD/DE-71對(duì)Ⅰ型脫碘酶基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程的影響隨著暴露時(shí)間的不同表現(xiàn)出的毒性效果也出現(xiàn)差異。但對(duì)Ⅱ型脫碘酶來(lái)說(shuō)，HBCD對(duì)D2的基因轉(zhuǎn)錄水平表現(xiàn)為抑制作用趨勢(shì)，而H