1、皮膚是人體最大的器官，作為機體與外界的屏障發(fā)揮著重要作用。它保護機體免受物理性、機械性、化學性和病原微生物的侵襲;阻止體內(nèi)水、電解質(zhì)及各種營養(yǎng)物質(zhì)的大量流失;感知各種感覺，引起相應的神經(jīng)反射，使人遠離有害刺激;其內(nèi)的角質(zhì)層、毛囊、皮脂腺和汗管具有吸收功能，也能分泌汗液、皮脂等;皮膚也是體溫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的重要組成部分;同時它還是免疫和心理器官?？偠灾?，皮膚對維系人的身心健康起著不可替代的作用。然而，在現(xiàn)代社會中，與皮膚有關(guān)的創(chuàng)面問題卻是臨床

2、上最常見的病癥之一，交通傷、事故傷、壓力性潰瘍、血管病變性創(chuàng)面和燒傷等諸多疾病或多或少都存在皮膚缺損的問題。通常，創(chuàng)面的處理是在保證創(chuàng)面清潔干凈的基礎(chǔ)上，對因?qū)ΠY進行治療，但不論哪種治療都離不開創(chuàng)面覆蓋物的輔助，作為臨床上最常見的醫(yī)療耗材，創(chuàng)面敷料對創(chuàng)面愈合起著重要的作用。
　　目前，臨床上使用的創(chuàng)面敷料種類很多，但是普遍存在結(jié)構(gòu)單一，價格昂貴等問題。熱塑性聚氨酯彈性體，英文名Thermoplastic polyurethanes

3、 elastomer，簡稱TPU，是一種綜合性能優(yōu)異的有機高分子材料。TPU具有良好的化學穩(wěn)定性和易加工性;同時兼具優(yōu)異的生物相容性，早已經(jīng)通過FDA（Food and Drug Administration，美國食品藥品監(jiān)督管理局）的認證并廣泛運用于醫(yī)療產(chǎn)品的制備中;而且TPU價格低廉，在成本控制方面具有顯著優(yōu)勢。理論上講，TPU可用作創(chuàng)面敷料的制備，但目前國內(nèi)外均尚未出現(xiàn)利用TPU來制備創(chuàng)面敷料的相關(guān)報道。1962年，Winter教

4、授提出了濕性創(chuàng)面愈合理論，經(jīng)過幾十年的發(fā)展，如今單純地以濕性愈合原理作為指導而研發(fā)的敷料已越來越少，采用新型的生物材料和現(xiàn)代化的制造技術(shù)、結(jié)合細胞和生長因子、在結(jié)構(gòu)和功能上模仿正常皮膚已成為創(chuàng)面敷料研發(fā)的新方向。
　　TIPS（Thermally induced phase separation，熱致相分離法）是當前制備高分子多孔膜最常見的方法，在本課題中，我們根據(jù)前期的研究成果，在傳統(tǒng)工藝的基礎(chǔ)上，對制備TPU多孔膜的方法進行改

5、進，采用新型粒子瀝慮-浸沒沉淀法對TPU進行加工，成功地制備了具有仿生結(jié)構(gòu)的TPU多孔膜。已有文獻證實雙層敷料對細胞的增殖和創(chuàng)面組織的修復有促進作用，結(jié)合TPU多孔膜良好的理化性質(zhì)及仿生的結(jié)構(gòu)，我們預測仿生TPU多孔膜用作創(chuàng)面覆蓋物能對創(chuàng)面的愈合起到積極的作用。
　　目的：
　　本研究以TPU為原料，采用粒子瀝慮-浸沒沉淀法制備具有仿生結(jié)構(gòu)的TPU多孔膜;在此基礎(chǔ)上，測試仿生TPU多孔膜相關(guān)物理表征、生物相容性以及對創(chuàng)面愈合

6、的影響。我們希望此研究能夠為臨床上創(chuàng)面的治療提供一個新的選擇，同時進一步拓寬TPU材料的應用范圍。
　　方法：
　　1.TPU多孔膜的制備：
　　通過TIPS法制備普通TPU多孔膜;通過粒子瀝慮-浸沒沉淀法制備仿生TPU多孔膜。
　　2.TPU多孔膜的觀察及表征的測定：
　　(1)觀察兩種不同TPU多孔膜的外觀及微觀結(jié)構(gòu)。
　　(2)計數(shù)孔的數(shù)量和測量孔徑大小，測定多孔膜的拉伸強度、斷裂伸長率及水蒸氣

7、透過率。
　　3.TPU多孔膜的細胞毒性：
　　實驗方法參考GB/T16886.5，將TPU多孔膜的浸提液與人成纖維細胞共培養(yǎng)，設(shè)立陰性、陽性及空白對照組，在細胞接種后第1天、3天、5天和7天，觀察各組的細胞形態(tài)并檢測細胞數(shù)量。
　　4.TPU多孔膜對創(chuàng)面愈合的影響：
　　(1)在Balb/c小鼠的背部制造直徑為4mm的皮膚全層缺損，使用仿生TPU多孔膜、普通TPU多孔膜、凡士林紗布作為創(chuàng)面覆蓋物，并設(shè)置空白對照

8、組，觀察比較各組小鼠在設(shè)定時間點創(chuàng)面愈合的情況。
　　(2)在致創(chuàng)后第3天及第7天，對創(chuàng)面組織進行取材并固定，制備病理切片，采用HE染色（Hematoxylin-eosin staining，蘇木素-伊紅染色），對切片進行觀察并記錄，利用Image J1.50i（圖像處理軟件）測量新生上皮長度及肉芽組織厚度。
　　(3)在致創(chuàng)后第5天，對創(chuàng)面組織進行取材并提取蛋白，WB（Western blot，蛋白印跡法）檢測創(chuàng)面組織中P

9、CNA（Proliferating cell nuclear antigen，增殖細胞核抗原）及CD31（Platelet endothelial cell adhesion molecule-1，血小板-內(nèi)皮細胞粘附分子）的表達。
　　結(jié)果：
　　1.仿生TPU多孔膜在外觀、拉伸強度、斷裂伸長率及水蒸氣透過率上均優(yōu)于普通TPU多孔膜;除此之外，仿生TPU多孔膜外表面的孔徑為微米級，孔徑上小下大，內(nèi)部呈海綿狀，在一定程度上模

10、擬了人體正常皮膚結(jié)構(gòu)。我們測得這一批次的仿生TPU多孔膜厚度為2.08mm，上下表面的孔徑分別為2.11±0.62μm和92.18±18.36μm;普通TPU多孔膜厚度為2.20mm，上下表面的孔徑分別為0.20±0.16μm和36.57±14.70μm。
　　2.浸提液與人成纖維細胞共培養(yǎng)后第1天、3天、5天和7天，普通TPU多孔膜組和仿生TPU多孔膜組與陰性對照組和空白對照組相比，細胞形態(tài)無明顯差別，細胞的相對數(shù)量（OD值）無

11、統(tǒng)計學差異，表明其在數(shù)量上增殖趨勢一致，提示TPU多孔膜敷料生物相容性良好。
　　3.在動物實驗中，空白對照組、凡士林紗布組、普通TPU多孔膜組及仿生TPU多孔膜組創(chuàng)面愈合的平均時間分別是9.5±0.55天、9.3±0.52天、8.68±0.82天和7.14±0.41天，說明仿生TPU多孔膜用作創(chuàng)面覆蓋物，與其他各實驗組相比，能顯著縮短創(chuàng)面的愈合時間。
　　4.在創(chuàng)后第3天及第7天，仿生TPU多孔膜組的新生上皮長度分別是10

12、52±317μm與2414±703μm，普通TPU多孔膜組的分別是644±176μm與1920±654μm，凡士林紗布組的分別是481±119μm與1570±506μm，空白對照組的分別是446±143μm與1416±610μm;致創(chuàng)后第7天，各實驗組創(chuàng)面肉芽組織的厚度，分別是501±168μm、415±113μm、607±68μm及803±118μm。說明在致創(chuàng)后第3天及第7天，仿生TPU多孔膜組創(chuàng)面新生上皮長度明顯長于其他各組;在致

13、創(chuàng)后第7天時，其肉芽組織厚度也顯著大于其他實驗組。
　　5.在致創(chuàng)后第5天，仿生TPU多孔膜組創(chuàng)面組織中的PCNA及CD31的表達強度明顯高于空白對照組、凡士林紗布組及普通TPU多孔膜組，提示仿生TPU多孔膜可促進創(chuàng)周細胞的增殖和創(chuàng)面新生組織的血管化。
　　結(jié)論：
　　在本研究中，我們改進了制備TPU多孔膜的工藝，采用新型粒子瀝慮-浸沒沉淀法成功地制備了仿生TPU多孔膜。與傳統(tǒng)方法制備的產(chǎn)品相比，采用新方法制備的TPU

14、多孔膜除了在外觀、力學性質(zhì)及水蒸氣透過率上具有明顯優(yōu)勢外，其結(jié)構(gòu)更是具有仿生的特性—外表面孔徑為微米級，具有防止細菌入侵的屏障作用，內(nèi)部的海綿結(jié)構(gòu)，可作為儲藏池引流吸收滲液，內(nèi)表面的大孔徑有利創(chuàng)面細胞的增殖和組織的修復。除此之外，仿生TPU多孔膜具有良好的生物相容性。在小鼠皮膚全層創(chuàng)面愈合的實驗中，仿生TPU多孔膜覆蓋創(chuàng)面的愈合時間明顯短于普通TPU多孔膜組，凡士林紗布組及空白對照組。同時，我們發(fā)現(xiàn)使用仿生TPU多孔膜作為敷料的創(chuàng)面上皮